[发明专利]一种快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法

摘要

本发明公开了一种快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法：（1）愈伤组织的诱导及继代；（2）制备复方中药提取液：5-6份黄芪，3-6份淫羊藿，2份党参，3-5份伸筋草，2份天山雪莲，0.6份罗汉果；（3）快速高密度培养青钱柳悬浮细胞：所述青钱柳悬浮培养的培养基由以下组分组成：MS+5-8 mg/L复方中药提取液+0.05 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L NAA+0.6 mg/L KT+42 g/L 蔗糖，接种量为7%，摇瓶装液量的体积分数为38%，初始pH 值为5.0。在一个培养周期内，悬浮培养的青钱柳细胞的生长曲线呈“S”型，第8 d，青钱柳鲜重达到最大值208-389 g/L。

主权项

一种快速高密度培养青钱柳悬浮细胞的方法，其特征在于，步骤如下：（1）愈伤组织的诱导及继代：按照常规进行青钱柳愈伤组织的诱导，然后进行继代培养，在第9‑11代时，获得质地松散，生长旺盛稳定的淡黄色愈伤组织；（2）制备复方中药提取液：如下所述均为质量份；取5‑6份黄芪，3‑6份淫羊藿，2份党参，3‑5份伸筋草，2份天山雪莲，0.6份罗汉果，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至50份水时，将药液冻干为粉；精确称取100mg冻干粉，加入1mLPBS 并置于80℃助溶，8000r /min 离心10 min，取上清液过滤，分装并‑20℃保存；（3）快速高密度培养青钱柳悬浮细胞：取青钱柳生长旺盛、质地松散的淡黄色愈伤组织，用镊子夹碎后转移到液体培养基中振荡悬浮培养，培养温度26℃，摇床转速为120 r/min；所述青钱柳悬浮培养的培养基由以下组分组成：MS+5‑8 mg/L复方中药提取液+ 0.05 mg/L 2,4‑D+0.6 mg/L NAA+0.6 mg/L KT+42g/L 蔗糖，接种量为7%，摇瓶装液量的体积分数为38%，初始pH 值为5.0。