[发明专利]一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法

摘要

本发明公开了一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法，经过液体菌种培养、固体菌种培养、固体菌种液化等步骤，抛弃了液体菌种采用的发酵罐的繁琐的生产模式，并采用纸浆作为固体培养原料，保持了木生菌类需要木质素的特点，制成颗粒状，使菌丝在培养容器内具有一定的间隙度，满足菌丝蔓延过程对氧气的需求。

主权项

一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法，其特征在于，包括如下具体步骤：一、液体菌种培养：（1‑1）制作液体培养基：每1000ml液体三角瓶培养液所需配料为：白糖20g、豆奶宝3.3g、磷酸二氢钾0.66g、硫酸镁0.66g，称取各种原料后混合均匀；将配好的料装入1000ml的三角瓶中，并充分搅拌溶解，放入一个转子，然后用纯水定容至600ml，且要求PH值在6.2至6.5；将装好料的三角瓶塞上棉塞，并在棉塞外套上锡箔纸，确保锡箔纸完全包裹住棉塞，然后放于高压灭菌锅中，于121℃条件下灭菌60min后取出；将取出的三角瓶在超净台中冷却至18℃至22℃即可准备接种；（1‑2）接种：将接种针深入平板培养基，刮掉斜面表面的气生菌丝，再用直径10mm的打孔器沿着菌丝蔓延生长的边缘均匀打孔一圈；盖上平板盖备；将冷却后的液体三角瓶瓶口靠近酒精灯火焰，并取下锡箔纸和棉塞，快速用接种针分别从平板培养基内选取4颗菌种，放置过程中接种针不要触碰三角瓶内壁；操作完成后分别将棉塞和锡箔纸在火焰上过火后再把三角瓶塞紧包好；（1‑3）培养：重复步骤（1‑2）操作直至接种结束，每个平板可转接2至3个三角瓶，然后将三角瓶放入摇床中震荡培养；培养温度为20度左右，振幅为250r/min；培养至第四天取出三角瓶，将液体菌种打碎20s，然后放回继续培养；培养至第9天取出三角瓶，将液体菌种打碎10min，即可用于制作原种；二、固体菌种培养：（2‑1）配料：每1100m1透明玻璃菌种瓶所需培养料为：纸浆颗粒280g、米糠100g、水310g；把水倒入米糠中搅拌成糊状后，倒入纸浆颗粒搅拌均匀，然后等待装料；（2‑2）装料：将上述配好的料装入1100m1透明玻璃菌种瓶中，装料高度为瓶口以下2‑3cm，中央打一个直径1‑1. 5cm、且直至瓶底的孔洞，采用透气瓶盖盖住菌种瓶并包上牛皮纸；（2‑3）灭菌：将制作好的菌种瓶放于灭菌锅中，于121℃条件下灭菌90min；（2‑4）接种：待菌种瓶及瓶中的培养料降至室温以后进行接种，每个液体菌种瓶可以转接16个左右的固体培养瓶；（2‑5）培养：菌种瓶接种好以后放于恒温室中进行培养，培养温度为18‑20℃，避光培养，培养湿度为55‑70，培养24‑26天，原种菌种瓶中长满菌丝即可；三、固体菌种液化：将固体菌种瓶放置于接种机上打碎，在固体储存罐内液化、稀释，菌种稀释后储存在菌种罐内，连续间歇性提供给接种机，再接种到液体菌种瓶内培养。