[发明专利]一种罗汉果愈伤组织的诱导方法

摘要

本发明公开了一种罗汉果愈伤组织的诱导方法：（1）暗培养；（2）光培养：转入光培养基进行光培养，每天光照12h/d，光照强度2600 lx；所述光培养的培养基为：以MS为基础培养基，蔗糖12.8g/L、琼脂3.5g/L，复方中药提取液0.2 g/L、6-BA 1.0mg/L,pH6.5；所述复方中药提取液由黄芪，天山雪莲，党参，伸筋草，茯苓，葛根制成。光培养仅仅10天就得到黄白色愈伤组织，且长势良好，分化率高，具体而言是90%以上，而且愈伤组织继代增殖分化出大量无根小苗,再诱导生根成苗,然后炼苗、田间移栽、成活率达98％以上。

主权项

一种罗汉果愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下：（1）暗培养：取健壮且无病虫害嫩梢，冲洗干净后用75%的酒精进行消毒20s，用无菌水冲洗5次，再加入0.1%汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒5min，然后用无菌水冲洗5次以上，沥干水分；将灭菌好的茎段切成1cm带腋芽的小段，形态学上端朝上，形态学下端朝下，顶部尽量刚好与培养基表面接触，盖好瓶盖，放在恒温培养箱中进行暗培养，培养的温度为27℃，暗培养10天；所述暗培养的培养基为：以MS为基础培养基，蔗糖13.5g/L、琼脂3.5g/L，pH5.8～6.0；（2）光培养：转入光培养基进行光培养，每天光照12h/d，光照强度2600 lx；所述光培养的培养基为：以MS为基础培养基，蔗糖12.8g/L、琼脂3.5g/L，复方中药提取液0.2 g/L、6‑BA 1.0mg/L,pH6.5；所述复方中药提取液的制备方法为：如下所述均为质量份；取黄芪，天山雪莲，党参，伸筋草，茯苓，葛根，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，将药液冻干为粉；精确称取100mg冻干粉，加入1mLPBS 并置于80℃助溶，8000r /min 离心10 min，取上清液过滤，分装并‑20℃保存。