[发明专利]一种利用斑马鱼胚胎致畸率进行低剂量伽马辐射生物预警的方法

摘要

本发明涉及一种利用斑马鱼胚胎致畸率进行低剂量伽马辐射生物预警的方法。利用斑马鱼胚胎对低剂量伽马辐射敏感的特性，根据斑马鱼胚胎接受的辐射剂量与致畸率之间的剂量‑效应关系，通过计算不同低剂量伽马辐射剂量条件下斑马鱼胚胎的致畸率，来评估低剂量伽马辐射对斑马鱼胚胎的综合毒性作用，建立生物预警方法。该方法具有操作简便快速、成本低廉、灵敏度高、准确性好、环境风险小等多重优点。

主权项

1.一种利用斑马鱼胚胎致畸率进行低剂量伽马辐射生物预警的方法，利用斑马鱼胚胎对低剂量伽马辐射敏感的特性，根据斑马鱼胚胎接受的辐射剂量与致畸率之间的剂量‑效应关系，通过计算斑马鱼胚胎致畸率，评估低剂量辐射对斑马鱼胚胎的综合毒性作用，建立生物预警，具体步骤是：(1)受精卵的采集；(2)受精卵的培养；(3)伽马射线辐照；(4)受精卵的孵化；(5)计算致畸率；(6)综合评价，并进行生物预警；所述的受精卵的采集的具体是：采用5～6月龄的斑马鱼进行繁殖产卵，在交配前2d将斑马鱼雌雄分群养在不同的饲养缸中，繁殖产卵的前夜，将雌雄亲鱼按照1∶2的比例放入同一交配装置中，雌雄鱼之间用挡板隔开，控制光照周期为14∶10，光照14h，黑暗10h，黑暗10h后，将雌雄亲鱼之间的隔板拿开，雄鱼会追逐雌鱼，并用身体冲撞雌鱼的腹部，此时雄鱼排精，雌鱼开始产卵，等产卵结束后，将亲鱼放回各自的饲养缸内，用吸管轻轻地将产卵装置中的粪便及呈白色的死卵除尽，并用孵化液及时冲洗盒内的受精卵，在孵化液中加入几滴1‰的亚甲基蓝溶液预防鱼卵被细菌感染，孵化液主要配方是10L蒸馏水、0.127g KCl、2.867g NaCl、0.817g MgSO4·7H2O、0.365g无水CaCl2；所述的受精卵的培养的方法是：收集的斑马鱼受精卵冲洗干净后，放入细胞培养板12孔板中培养，每孔5枚受精卵，每板放10孔共计50个胚胎，采用2mL的吸管对受精卵进行移动,移动时对受精卵的震动不能太大，在12孔板中倒入10mL的孵化液,在28℃±0.5℃的温度条件下进行培养，所述的伽马射线辐照的方法是：待斑马鱼受精卵培养至5.5h，此时受精卵处于原肠胚初期，将斑马鱼受精卵接受辐照剂量为0.01‑10Gy伽马射线辐射，采用转动12孔板和移动辐照源相结合的方式保证斑马鱼受精卵均匀辐照；所述的受精卵的孵化的方法是：将辐照后的斑马鱼胚胎放入28℃的恒温培养箱中培养，控制培养箱的光照周期为14∶10，每5～6h换1/2的孵化液，定期观察，随时剔除死卵，待斑马鱼受精卵培养至36h时，斑马鱼幼体开始破膜孵出；其特征在于，所述的计算致畸率的方法是：斑马鱼幼体开始破膜孵出时，采用显微镜观察斑马鱼幼体，记录斑马鱼幼体畸形数，畸形主要表现为脊柱弯曲、胸腔发育不良和心包囊水肿，直至斑马鱼受精卵培养至72h时，斑马鱼幼体畸形数统计结束，按照公式(1)计算致畸率，所述的综合评价，并进行生物预警的方法是：按照公式(1)计算斑马鱼胚胎的致畸率，来评估低剂量伽马辐照对斑马鱼胚胎的综合毒性，当斑马鱼胚胎致畸率大于1％而小于5％时，此时的低剂量伽马辐射的危害等级I级；当斑马鱼胚胎的致畸率大于5％而小于10％时，此时的低剂量伽马辐射的危害等级II级；当斑马鱼胚胎的致畸率大于10％而小于20％时，此时的低剂量伽马辐射的危害等级III级；当斑马鱼胚胎的致畸率大于20％而小于30％时，此时的低剂量伽马辐射的危害等级IV级；当斑马鱼胚胎的致畸率大于30％时，此时的低剂量伽马辐射的危害等级V级，最后，根据低剂量辐射的危害等级进行生物预警。