[发明专利]一种食源性致病菌肠杆科菌种的数值快速鉴定方法

摘要

本发明公开了一种食源性肠杆科菌种的数值快速鉴定方法。它包括肠杆科菌种类与阳性概率的确认；数值法中选择的生化反应；建立肠杆科菌的数据库，确定数值法中计算方法；待测菌的检测与鉴别。本发明可以对纯培养物预先进行革兰氏染色，氧化酶，OF试验，然后通过本发明的食源性致病菌肠杆科菌种的数值快速鉴定方法，一般对肠杆科菌能够得到较理想的鉴定结果。本发明可以鉴定出肠杆菌科31属139个菌种与8个未分类的群，共159个分类单元，并且可以将小肠结肠炎耶尔森菌氏菌鉴定至6种生化型。同时鉴定的菌种数量和准确性均可大大高于市场现有国际上公认的两个同类鉴定方法。

主权项

一种食源性致病菌肠杆科菌种的数值快速鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：a、确定肠杆科菌的种类及其至少24个生化实验出现阳性的概率，所述的24个生化实验为：苯丙氨酸脱氨、木糖、棉子糖、吲哚、蔗糖、鸟氨酸脱羧酶、乳糖、ONPG、尿酶、柠檬酸盐、麦芽糖、赖氨酸脱羧酶、丙二酸盐、山梨醇、卫矛醇、阿拉伯糖、蜜二糖、鼠李糖、七叶苷、MR、H₂S、海藻糖、纤维二糖、氧化酶；b、选择步骤a中的24个生化实验作为数值法中所需要的生化反应：c、建立肠杆科菌的数据库，确定数值法中计算方法：根据选择的分类单元与生化实验的阳性概率，形成一个概率矩阵；按照细菌概率鉴定理论确定每一个分类单元的总出现频率、多项总发生频率、鉴定百分数的计算方法，具体计算公式如下：每一个分类单元的总出现频率等于该分类单元对应的每个生化实验的阳性概率的乘积；多项总发生频率等于每一个分类单元的总出现频率的总和；鉴定百分数等于每一个分类单元总出现频率除以多项总发生频率再乘以100，全体鉴定百分数之和应等于100；d、待测菌株纯培养后，进行革兰氏染色，氧化酶，OF试验，选择革兰氏染色为阴性、氧化酶阴性，OF为发酵型的菌株进行步骤a的24种生化实验；e、获得待测菌株的24种生化实验结果后，根据生化反应的阴、阳、未知值，按照计算方法对数据库中所有分类单元进行计算，首先将生化实验值转换成概率值，即实验结果为阳性则就是对应生化实验的阳性概率值；若为阴性则100减去生化实验的阳性概率值，上述结果若是0或100，则用近似值1或99代替，再按照步骤c的计算方法计算每一个分类单元的总出现频率、多项总发生频率、鉴定百分数、若某项生化实验结果为未知或模糊不清，则该生化实验项不参与计算；f、根据计算结果，对待测菌株鉴定结果进行判定：根据鉴定百分数的大小进行排序，鉴定百分数最高相对应的菌株即为待测菌株所属的分类单元。