[发明专利]HPLC测定原料苯磺顺阿曲库铵含量的方法

摘要

本发明公开了一种HPLC测定原料苯磺顺阿曲库铵含量的方法，本发明建立了HPLC测定苯磺顺阿曲库铵含量的新色谱条件，采用等度洗脱的方式，使得流动相的配制由配制两份变为一份，显得更加方便、省时，同时等度洗脱更利于延长仪器以及色谱柱的寿命。本方法单针进样耗时25min，提高了检验效率，而且减少了流动相的消耗，从而降低检验成本。

主权项

一种HPLC测定原料苯磺顺阿曲库铵含量的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)进样重复性精密称取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，记录色谱图；(2)系统适应性精密称取苯磺酸阿曲库铵对照品10mg，置100ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液，同法配制六份，精密量取系统适应性溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；(3)溶液稳定性精密称取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，将供试品溶液在进样盘‑4℃条件下放置，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h，精密量供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；(4)检测限定量限精密称取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为3:1，即为检测限浓度；精密称取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液，逐级稀释，直至信号与噪音的比值约为10:1，即为定量限浓度，同法配制六份；精密量各供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；(5)回收率对照品溶液：取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，即得；同法配制两份；苯磺顺阿曲库铵贮备液：取取苯磺顺阿曲库铵对照品约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；供试品溶液：取贮备液4ml、5ml、6ml各三份，置10ml量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，即得；精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算回收率；(6)线性苯磺顺阿曲库铵贮备液：取苯磺顺阿曲库铵对照品约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；供试品溶液：精密量取该贮备液4ml、4.5ml、5ml、5.5ml、6ml分别置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为320μg/ml、360μg/ml、400μg/ml、440μg/ml、480μg/ml系列浓度的溶液；精密量取供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，每个浓度点平行进两针，记录色谱图；(7)重复性对照品溶液：取苯磺顺阿曲库铵对照品10mg两份，精密称定，分别置于25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；供试品溶液：取苯磺顺阿曲库铵样品10mg六份，精密称定，分别置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算苯磺顺阿曲库铵的含量；(8)中间精密度同重复性试验项下的供试品溶液配制，两名分析人员于不同时间、不同仪器进行重复性试验；精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算苯磺顺阿曲库铵的含量；(9)专属性酸碱空白：取0.1mol/L盐酸溶液1ml，置10ml具塞试管中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至中性，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；氧化空白：取30％双氧水1ml，置10ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；未破坏样品：取苯磺顺阿曲库铵样品10mg，置25ml量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，即得；酸破坏样品：取苯磺顺阿曲库铵样品10mg，置10ml具塞试管中，加0.1mol/L盐酸溶液1ml，摇匀，于室温放置30min后，加0.1mol/L氢氧化钠溶液调pH至中性，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；碱破坏样品：取苯磺顺阿曲库铵样品10mg，置10ml具塞试管中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，于室温放置30min后，加0.1mol/L盐酸溶液调pH至中性，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；氧化破坏样品：取苯磺顺阿曲库铵样品10mg，置10ml具塞试管中，加30％过氧化氢溶液1ml，摇匀，于室温放置30min后，加流动相定容至刻度，摇匀，再取500μL上述溶液至5mL量瓶，定容，摇匀，即得；精密量取溶剂、未破坏、氧化空白、酸碱空白及上述破坏样品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。