[发明专利]一种培养无菌蚕虫草的方法

摘要

本发明提供了一种培养无菌蚕虫草的方法，包括：将点青期或点青期以前的蚕卵消毒灭菌；将经过所述消毒灭菌后的所述蚕卵置于无菌隔离器中孵化；对在所述无菌隔离器中孵化出的所述无菌蚁蚕用灭菌人工饲料喂养；制取蛹虫草菌液；将蛹虫草菌液注入5龄第3～5天的无菌蚕的腹腔；长出少量菌丝的死亡僵硬的无菌蚕从所述饲育盘中取出，转入白天25℃光照、夜间20℃黑暗交替的无菌环境中培养38‑42天，此间保持所述环境湿度95％以上，即获得全身长满菌丝和长短不等的孢子梗的无菌蚕虫草。

主权项

1.一种培养无菌蚕虫草的方法，所述方法包括：(1)将点青期或点青期以前的蚕卵用75％乙醇和4％甲醛溶液浸泡消毒灭菌；(2)将经过所述消毒灭菌后的所述蚕卵置于无菌隔离器中孵化，所述无菌隔离器包括若干个水平放置的饲育盘，所述无菌隔离器保持孵化过程在黑暗状态下进行，所述孵化过程保持25℃的恒定温度，湿度为70‑80％，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输速率为250‑350升/天，直至获得无菌蚁蚕；(3)对在所述无菌隔离器中孵化出的所述无菌蚁蚕用灭菌人工饲料喂养，所述灭菌人工饲料为人工饲料经高压蒸汽灭菌，而后补足因灭菌损失的维生素获得，其中所述灭菌人工饲料包括：基于所述灭菌人工饲料的总重量，干桑叶粉36.5wt％、脱脂大豆粉35.4wt％、桑绿枝粉5wt％、玉米淀粉11.0wt％、蔗糖4.5％、维生素B1.5wt％、维生素C1.5wt％、宁檬酸2.0wt％、巴豆酸0.4wt％、氯化胆碱0.2wt％，所述灭菌人工饲料的总重量为100wt％,所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持27‑29℃的温度，湿度为70‑80％，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输速率为250‑350升/天，直至获得5龄第3～5天的无菌蚕；(4)制取蛹虫草菌液，其中包括将天然蛹虫草菌种转种土豆液体培养基，并将所述土豆液体培养基置于真菌培养箱内在20℃避光振摇培养5至7天；(5)将所述蛹虫草菌液注入步骤(3)中获得的所述5龄第3～5天的无菌蚕的腹腔，注射量为0.2～0.3毫升/条，将注射后的所述无菌蚕仍然置于所述无菌隔离器中饲养，所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持27‑29℃的温度，湿度为70‑80％，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输速率为250‑350升/天，直至所述无菌蚕死亡僵硬并长出少量菌丝；(6)将步骤(5)中获得的长出少量菌丝的死亡僵硬的无菌蚕从所述饲育盘中取出，转入白天25℃光照、夜间20℃黑暗交替的无菌环境中培养38‑42天，此间保持所述环境湿度95％以上，即获得全身长满菌丝和长短不等的孢子梗的无菌蚕虫草；其中所述灭菌人工饲料中还包括无机盐，所述无机盐选自以下物质的任意组合：碳酸钙、氯化钠、硫酸钾、硫酸锰、磷酸钙、硫酸镁、水合硫酸铜、水合硫酸铁以及氟化钠；其中所述饲育盘为抽屉式饲育盘。