[发明专利]一种介孔二氧化硅复合材料结合质谱鉴定肽段的方法

摘要

本发明提出了一种介孔二氧化硅复合材料结合质谱鉴定肽段的方法，将磁性微球四氧化三铁表面包覆全氟烷基修饰的介孔二氧化硅复合材料用于全氟烷基衍生的肽段的基质辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱分析。该材料对于氟相衍生的磷酸化肽显示出超强的亲和作用，同时在水溶液中保持了良好的分散性。该材料所具有的四氧化三铁磁性内核简化了富集分离的过程。基于该磁性微球表面包覆全氟烷基修饰的介孔二氧化硅复合材料的固相微萃取方法取得了对于非磷酸化肽的选择性富集，并被能够成功应用于人体血清中的内源性磷酸化肽的富集。

主权项

1.一种介孔二氧化硅复合材料结合质谱鉴定肽段的方法，其特征在于：将介孔二氧化硅复合材料配成浓度为10 mg/mL的分散液,溶剂为50%体积分数的乙醇；将该分散液加入全氟烷基衍生的肽段溶液稀释液中，混合，在酶解仪中孵育30‑60分钟；通过外加磁场分离出介孔二氧化硅复合材料，用去离子水洗涤，用0.4 M氨水洗脱；取1μL洗脱液点在基质辅助激光解吸电离‑飞行时间质谱靶板上，自然干燥后再滴加0.8 μL浓度为20 mg/mL的2,5‑二羟基苯甲酸溶液于被分析物液滴上，形成薄基质层，干后进行质谱分析；其中，所述介孔二氧化硅复合材料为磁性微球四氧化三铁表面包覆全氟烷基修饰的介孔二氧化硅复合材料；所述介孔二氧化硅复合材料的具体制备步骤如下：（1）将六水合三氯化铁溶于乙二醇中，磁力搅拌至澄清后，加入醋酸钠，充分搅拌溶解后转移至水热合成反应釜中，超声5分钟后，放入烘箱中190‑200℃下加热10‑18小时，取出反应釜，冷却10‑12小时；从反应釜中倒出反应所得的磁球，并用去离子水和无水乙醇充分洗涤，40‑60℃下真空干燥；（2）将步骤（1）所得产物与十六烷基三甲基溴化铵按质量比1：10分散在去离子水中，超声30分钟；将所得分散液与氢氧化钠溶液混合，超声5分钟后得到均一稳定的分散液；将该混合溶液在60℃水浴中加热搅拌30分钟后，向其中缓慢滴加正硅酸乙酯/乙醇溶液，滴加完毕后在60℃水浴中加热搅拌30分钟；（3）将1H,1H,2H,2H‑全氟癸基三乙氧基硅烷/正硅酸乙酯溶液滴加到步骤（2）所得产物中，在60℃水浴中加热搅拌12小时；（4）用磁铁将步骤（3）所得产物从反应液中分离出来，在60℃乙醇溶液中加热回流除去十六烷基三甲基溴化铵模板剂，在40‑60℃下真空干燥。