[发明专利]一种小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法

摘要

本发明为“一种小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法”，属于生物技术领域。本发明将温度的梯度变化和湿度相结合创建了一种新的简单高效的小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法。该技术方法实现小麦孢囊线虫侵染后二龄(J2)，三龄(J3)，四龄(J4)和白雌虫的同步发育，应用该方法能够大量分离获得同龄期幼虫。为小麦孢囊线虫侵染后不同龄期幼虫的差异基因的研究及不同龄期的基因功能差异分析研究，提供有效的获取不同龄期幼虫的方法。本发明以操作简便、操作条件适宜、所需设备简易、短期内即可获取大量同步发育的线虫的特点，在小麦孢囊线虫的分子生物学研究和教学中均具有极高的应用价值。

主权项

一种小麦孢囊线虫龄期同步发育的简易培养方法，包括如下步骤：(1)培养基质：所述培养基质为石英砂与田园土的体积比为3：1混合均匀，该石英砂粒径为500‑600μm；(2)接种方法：将根长1‑2cm的小麦幼苗移入铺满培养基质的培养皿中培养，然后以胶头滴管进行滴液接种，所述接种液为含有孢囊幼虫的溶液；(3)培养条件：接种后的小麦幼苗在13℃/8h黑暗条件，16℃/16h光照条件下培养48h；然后移出幼苗，在无菌水中轻轻洗去表面杂质和未侵染的幼虫，移栽于培养接种管内；移栽后的小麦幼苗在14℃/8h黑暗条件、18℃/16h光照条件下培养一周，在16℃/8h黑暗条件、20℃/16h光照条件下再培养两周，在18℃/8h黑暗条件、25℃/16h光照条件下再培养两周，在22℃/16h黑暗条件、30℃/8h光照条件下再培养一周；同时保持人工气候箱内湿度在75％‑85％；(4)不同龄期幼虫的收集：根据实验需求将含有所需发育阶段的幼虫小麦进行破碎分解，即可获得繁殖后的同步发育的小麦孢囊线虫幼虫，侵染后二龄发育阶段为接种管内培养5‑11天，三龄发育阶段为接种管内培养12‑18天，四龄发育阶段为接种管内培养19‑25天，白雌虫出现阶段为接种管内培养30天之后。