[发明专利]代谢互补的植物细胞系混种培养生产次级代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种代谢互补的植物细胞系混种培养生产次级代谢产物的方法，它是在单独采用一株细胞系生产目标产物基础上，使用两株或多株细胞系混合培养，在目标产物生产过程中进行代谢偶联，提高目标产物的产量。实验结果显示：采用两株细胞或多株系混合培养后，目标产物的产量比原来单株的产量提高了13%~90%。

主权项

1.一种代谢互补的植物细胞系混种培养生产次级代谢产物的方法，其特征按如下的步骤进行：（1）植物细胞系1，高产目标产物的中间体，培养条件为：B5培养基包括：生长素为2,4‑D，含量1~10mg/L，分裂素为6‑BA，含量为0.5~5mg/L，蔗糖浓度为10~50g/L，接种的细胞鲜重为50~200g/L，接种的为100%膜过滤新鲜B5培养基，继代生长周期为7~14天，培养温度为22~27℃，摇床转速为80~130rpm；所述的植物细胞系1为Taxus wallichiana var. mairei，其保藏编号CGMCC no10001；（2）植物细胞系2，高产目标产物，培养条件与植物细胞系1相同；所述的植物细胞系2为： Taxus wallichiana var. mairei，其保藏编号CGMCC no10002；（3）将植物细胞系1和植物细胞系2，按照体积比为10:1~1:10混合后进行培养，培养基为B5培养基，其中生长素为2,4‑D，含量10mg/L，分裂素为6‑BA，含量为1mg/L，蔗糖浓度为15g/L，接种的细胞鲜重为100g/L，接种的为100%新鲜膜过滤B5培养基，继代生长周期为14天，培养温度为25℃，摇床转速为100rpm；（4）培养结束后，将步骤（3）的混合细胞接种到目标产物生产培养基MS中，所述的MS培养基包括：分裂素为6‑BA，含量为0.5~5mg/L，生长素为NAA，含量为1~20mg/L，蔗糖浓度为10~50g/L，接种的细胞鲜重为100~200g/L，接种的为膜过滤100%新鲜MS培养基，培养条件为：培养温度为22~27℃，摇床转速为80~130rpm，培养周期为21‑45天；（5）在培养的第4~8天添加甲基茉莉酸50~200μM，第6~12天添加硫代硫酸银5~20mM，在培养的第14天开始每隔两天进行一次取样，测定细胞量、细胞活性、pH、电导率、残糖、溶氧、目标产物中间体和目标产物的产量；（6）培养过程中目标产物生产培养基MS的糖浓度控制在10~25g/L之间，电导率控制在1.5~3mS/cm之间；取样检测后，根据测定的值进行补加糖和无机盐。