[发明专利]一种心叶小花苣苔两步成苗组培快速繁殖的方法

摘要

一种心叶小花苣苔两步成苗组培快速繁殖的方法，包括如下步骤：(1)以心叶小花苣苔叶片为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养中培养诱导出不定芽；(3)将不定芽置于MS基本培养基中，经继代增殖培养后获得大量丛生芽；(4)将丛生芽剪切成单芽置于添加不同生长素的MS基本培养基中进行培养，得到生根苗。利用本发明的方法，外植体消毒培养7d便开始长出不定芽，出芽率为86.9％，增殖系数为6.1，生根率为89.5％。本发明能在短期内提供大量优质种苗，对进一步保护和利用苦苣苔科植物资源、拯救物种具有十分重要的意义。

主权项

一种心叶小花苣苔两步成苗组培快速繁殖的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的消毒：取无病虫害心叶小花苣苔的幼嫩叶片，用软纱布擦拭表面污垢，流水冲洗2min，然后在超净工作台内用75v/v％的乙醇消毒15s，无菌水冲洗1次，再用0.1v/v％HgCl₂消毒6min，无菌水浸泡2次，每次约1min，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，获得外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)无菌芽的诱导：将步骤(1)得到的外植体剪切成1～1.5cm²的叶片，接种于外植体诱导培养基中，在培养温度23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下进行培养7～12d开始萌发，随后长出不定芽，所述外植体诱导培养基是以MS为基本培养基，还加入0.1～2.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.05～1.0mg/L萘乙酸NAA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)不定芽的增殖培养：将步骤(2)中得到的不定芽或芽丛置于MS增殖培养基中，在培养温度23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下进行培养50d，长出更多的丛生芽，所述增殖培养基是以MS为基本培养基，还加入0.3～2.0mg/L的噻重氮苯基脲TDZ、0.1‑1.0mg/L的萘乙酸NAA，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)不定芽的生根：将步骤(3)中得到的丛生芽剪切为单芽置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下进行生根培养10～15d便开始生根，所述1/2MS生根培养基是以1/2MS为基本培养基，还加入0.1～1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.05～1.0mg/L的吲哚丁酸IBA，0.5～1.5g/L的活性炭，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。