[发明专利]从黄绿蜜环菌中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用

摘要

本发明提供一种从黄绿蜜环菌中提取抗肿瘤活性组分的方法，包括以下步骤：黄绿蜜环菌子实体磨粉后乙酸乙酯提取；取上清进行一维液相分离，采用Silica正相硅胶色谱柱，A相正己烷、B相乙醇二元有机相，B相浓度由0％至75％梯度洗脱；收集10-14min洗脱液进行二维液相分离，洗脱方式为B相浓度4-8％等度洗脱；收集6-8min洗脱液进行三维液相分离，洗脱方式为B相浓度2-3％等度洗脱，收集7.5-12min洗脱液并蒸干得目的产物。该方法采用高效液相色谱进行分离纯化，重复性高，制备量大，操作简单省时。实验发现该化合物对Hep-g2具抑制作用，故具有抗癌药物开发潜力，为新药研发提供理论依据。

主权项

一种从黄绿蜜环菌中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以黄绿蜜环菌子实体为原料，经干燥并磨成粉末状后，用乙酸乙酯以液固比(5‑10)mL︰1g进行浸泡，然后过滤取上清，得到乙酸乙酯提取液，并浓缩至膏状；(2)使用乙醇体积分数为10‑35％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解步骤(1)得到的膏状乙酸乙酯提取物，得到100‑150mg/mL的上样溶液；(3)对上样溶液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷、B相为乙醇，进样量为50‑150mL/针，流动相流速为550‑600mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长210‑260nm；采用的洗脱方式为B相浓度由0％至75％梯度洗脱，根据紫外吸收光谱收集10‑14min洗脱液，减压浓缩至膏状，得到一维液相组分；(4)用乙醇体积分数为2‑13％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50‑100mg/mL；(5)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷、B相为乙醇，进样量为500‑2000μL/针，流动相流速为10‑30mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长210‑260nm，采用的洗脱方式为B相浓度4‑8％等度洗脱，根据紫外吸收光谱收集6‑8min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得到二维液相组分；(6)用乙醇体积分数为2‑13％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解二维液相组分，溶解至浓度为50‑100mg/mL；(7)进行再分离纯化：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷、B相为乙醇，进样量为300‑1500μL/针，流动相流速为10‑30mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长210‑260nm，采用的洗脱方式为B相浓度2‑3％等度洗脱，根据紫外吸收光谱收集7.5‑12min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得到本发明抗肿瘤活性组分。