[发明专利]一种基于数字PCR技术检测人Septin 9基因甲基化的方法及所用探针与引物及其试剂盒

摘要

一种基于数字PCR技术检测人Septin 9基因甲基化的方法及所用探针与引物及其试剂盒，方法包括：将待测DNA模板、PCR引物、可检测标记物及PCR预混液混合，制备数字PCR混合液；制备PCR微反应液滴；对PCR微反应液滴进行PCR扩增；对扩增后产物进行信号收集，判断是否含甲基化人Septin 9基因及其数量和含量，其中可检测标记物为SEQ ID No：1、SEQ ID No：2或SEQ ID No：3所示的TaqMan探针或EvaGreen荧光染料，所述PCR引物包括SEQ ID No：4或SEQID No：6所示的正向引物和SEQ ID No：5或SEQ ID No：7所示的反向引物。本发明的方法和试剂盒灵敏度高、特异性强、稳定性好、依从性高。

主权项

一种基于数字PCR技术检测人Septin 9基因甲基化的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待测的DNA模板、PCR引物、可检测标记物以及PCR预混液混合，制备数字PCR混合液；(2)利用步骤(1)所制备的数字PCR混合液，通过微滴发生器或微流体制备系统制备可独自进行PCR扩增反应的PCR微反应液滴；(3)对步骤(2)所制备的PCR微反应液滴进行PCR扩增反应；(4)对经步骤(3)PCR扩增反应后的产物进行信号收集，根据荧光信号的有无判断待测样品中是否含甲基化的人Septin 9基因及其数量和含量；其中，所述可检测标记物为TaqMan探针或EvaGreen荧光染料，所述TaqMan探针为连接报告荧光基团和淬灭基团的核苷酸，其核苷酸序列如SEQ ID No：1、SEQ ID No：2或SEQ ID No：3所示；并且，所述PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No：4或SEQ ID No：6所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No：5或SEQ ID No：7所示。