[发明专利]一种树脂固定卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的工艺

摘要

本发明涉及一种树脂固定卤醇脱卤酶催化合成(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的工艺，以(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯(ATS-4)为底物，采用酶法合成ATS-5，针对酶法反应速率和转化率较低的缺陷，选取树脂为载体，吸附法HDHH，该法能使得酶重复利用，提高底物转化率及产物得率，从而降低生产成本，经试验，HHDH的固定率在45％以上，第一次ATS-5产物生成率在75％以上，甚至高达94.13％，固定化酶回收利用之后第二次转化率在35％以上，最高至50％，反应条件温和，无酶残留，酶可重复利用，反应速度快，成本低，产物得率高，并且没有副反应存在，适合工业化大生产。

主权项

一种树脂固定卤醇脱卤酶催化合成(R)‑4‑氰基‑3‑羟基丁酸乙酯的工艺，包括如下步骤：1)将吸附树脂用蒸馏水浸泡，去杂，然后在搅拌条件下用碱液和酸液交替浸泡2‑4次，最后用蒸馏水冲洗至中性，得预处理吸附树脂，并用吸附树脂的2倍体积以上的4℃的蒸馏水浸泡待用；2)配制48U/mL的卤醇脱卤酶溶液，在4℃的条件下放置待用；配制0.1mol/L、pH为6.5‑8.0磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液待用；3)将30g预处理的吸附树脂加入到50‑150mL的卤醇脱卤酶溶液中，用磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液调节pH至6.8‑7.4，并在15‑30℃的条件下，搅拌4‑10h，得吸附树脂固定卤醇脱卤酶；4)称取207g蒸馏水、1.5‑2.5g氰化钠，逐一加入四口烧瓶中，并调节pH至7.5‑8.5左右；5)加入40‑50g底物ATS‑4，并升温，待温度大于46℃时加入15g吸附树脂固定卤醇脱卤酶，反应1‑4h，调节pH为6.90‑7.05，用有机溶剂萃取、精馏，得(R)‑4‑氰基‑3‑羟基丁酸乙酯。