[发明专利]一种金线莲种质资源的低温保存方法

摘要

本发明公开一种金线莲种质资源的低温保存方法，包括采集野生种苗，将外植体初步处理并进行高温钝化后；在超净工作台进行灭菌处理，后转入金线莲初代培养基中进行低温诱导分化。分化后经低温、暗处理一段时间，再将芽球转入金线莲继代培养基中。在常温、光照条件下，培养一段后，再将芽球转入低温、暗处理，最后将小植株转入金线莲培养基中常温、光照下培养。本发明方法具有成本低，操作简易，实用性强的优点，能够很好地保护金线莲这一珍贵的药用资源，保护生物的多样性。

主权项

1.一种金线莲种质资源的低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：1）野生种苗的采集：到原生境采集生长健壮、无病虫害的金线莲植株；2）原料处理：将采集的野生种苗清洗干净，晾干水分后，用3‑5g/L的灭菌洗衣粉液浸泡20‑30分钟后，将其冲洗干净后晾干水分，进行高温钝化；所述高温钝化的温度为35‑45℃，钝化时间为10‑12小时；3）无菌操作：切取种苗的茎尖或茎段进行灭菌处理，转入金线莲初代培养基，所述的金线莲初代培养基由MS、6‑BA、ZT、2,4‑D、NAA、蔗糖和琼脂组成，培养基pH为5.5‑6.0；所述金线莲初代培养基中以MS为基础培养基，其余各组分含量分别为：6‑BA 1‑5mg/L、ZT 1.5‑6.5mg/L、2,4‑D 0.5‑2.0mg/L、NAA 0.5‑2.5mg/L、蔗糖30‑45g/L和琼脂5.5‑6.5g/L；4）第一阶段，即第1‑12个月，将无菌操作后的种苗进行低温诱导分化；所述低温诱导分化温度为2‑8℃；5）第二阶段，即第13‑60个月，将分化后的种苗进行低温、暗处理，温度控制在2‑7℃；6）第三阶段，即第61‑72个月，将种苗转入金线莲继代培养基，所述的金线莲继代培养基由MS、6‑BA、ZT 、NAA、蔗糖和琼脂组成，培养基的pH为5.5‑6.0，将其置于常温、光照下培养；所述金线莲继代培养基中以MS为基础培养基，其余各组分含量分别为： 6‑BA 1‑5mg/L、ZT 1.5‑5.5mg/L、NAA 0.5‑1.5mg/L、蔗糖30‑45g/L和琼脂5.5‑6.5g/L；7）第四阶段，即第73‑96个月，将种苗转入低温、暗处理，温度控制在2‑7℃；8）第五阶段，即第97‑120个月，再将种苗转入金线莲培养基中，所述的金线莲培养基由MS、6‑BA、ZT、NAA、蔗糖和琼脂组成；所述金线莲培养基中以MS为基础培养基，其余各组分含量分别为： 6‑BA 0.5‑5.5mg/L、ZT 1.5‑6.5mg/L、NAA 0.5‑1.0mg/L、蔗糖30‑45g/L和琼脂5.5‑6.5g/L；培养基的 pH为5.5‑6.0，置于常温、光照下培养。