[发明专利]一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括PCR扩增反应试剂以及用于样本DNA中ATP8B1基因/ABCB4基因/ABCB11基因扩增的PCR引物。检测方法包括样品采集、PCR扩增以及测序。本发明可用于检测ATP8B1基因/ABCB4基因/ABCB11基因的突变位点，特异性好，灵敏度高；家系成员进行筛查可明确发病风险，产前筛查并进行干预，可降低后代进行性家族性肝胆汁淤积症的发病率，使用方法简单，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种检测进行性家族性肝胆汁淤积症基因突变的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括PCR扩增反应试剂以及用于样本DNA中ATP8B1基因、ABCB4基因、ABCB11基因扩增的PCR引物；其中，PCR引物如下：ATP8B1基因：ATP8B1‑4‑F：CATAAGCCACCGCACCCAGACA；ATP8B1‑4‑R：TCCATTTGCTCCCTTTCCCT；ATP8B1‑5/6‑F：TGATGACGGTGATGAGACTTGG；ATP8B1‑5/6‑R：GTAATCCCATCTACTCGGAGGCTGA；ATP8B1‑7/8‑F：CTTTAATATGTTTACATCCATTAAAGAGC；ATP8B1‑7/8‑R：CAGTGGAATGAATGTGCCTT；ATP8B1‑9/10‑F：TTTAATTCATTTTTTCCCCATTC；ATP8B1‑9/10‑R：TCTTCTTTTGGTTTTGATGGAC；ATP8B1‑11‑F：CTGTCTCCTGGGTTCAAGTGATTCT；ATP8B1‑11‑R：TCCAGTTCCCGTCATCAAAGCAC；ATP8B1‑12‑F：CTAGGAAATGCAAGAGGTTGGAAATC；ATP8B1‑12‑R：AAATGAAGGCACTATGTTGGGAGAA；ATP8B1‑13‑F：GGGATTCTAACATTCAGACCATAGC；ATP8B1‑13‑R：CCAGCAATGCCAGGAGAC；ATP8B1‑14‑F：TAGGGCACTGAGGGGCTGAGGA；ATP8B1‑14‑R：TGGGCAACCACCAGGAGCAG；ATP8B1‑15‑F：ATAATTGAAACCTTGCCTTTGAA；ATP8B1‑15‑R：TGTTTCCTACTTTGCTCTTCCAT；ATP8B1‑16‑F：TGGCATAACCCTTCCAAGTCAAT；ATP8B1‑16‑R：CCCAGCCAACAATACCAGTTTCA；ATP8B1‑17‑Fy：AGCCTGGACAACAGAGCAAGAC；ATP8B1‑17‑Ry：CAGTTAACATACAGCTTTCATGCAA；ATP8B1‑18‑F：AAGTGTATTTGTACAGAATCTGTCATGTT；ATP8B1‑18‑R：ACCTTCTTCCATTGTGCCA；ATP8B1‑19‑F：GGAGAGCAGCAACCAGGATGT；ATP8B1‑19‑R：AAGGAAGAAACTGCTACTGAGGG；ATP8B1‑20‑F：TGAATCCTGGAGGTTGAGGCTGT；ATP8B1‑20‑R：GCTGAGAAGGAATGGAGAAAAATGG；ATP8B1‑21‑F：AAGTCAAAGTTATCTCAGAGTCAAG；ATP8B1‑21‑R：CTTTCATGTATAGGCTAAGAGACTT；ATP8B1‑22‑F：CAGAATGAAATTCTTCTCGAGA；ATP8B1‑22‑R：AAACATCTGCTCTATGAAAACCTA；ATP8B1‑23‑F：TGGAACCATTTTTATCAACTGAT；ATP8B1‑23‑R：GCACCAGAAACATTTAGAGAAGTC；ATP8B1‑24‑F：AGCAAGACCCCCATCTCTATTAAAA；ATP8B1‑24‑R：TATTACAAAACAAGAAGCACAGCCA；ATP8B1‑25‑F：GCCTTCCTAAAATTTAACAGCAG；ATP8B1‑25‑R：TCAGGCAAGAAATAGAAAATGTG；ATP8B1‑26‑F：TTGCCTGAGTCAAGGATGGTTTA；ATP8B1‑26‑R：AGCCACTGTGCCCAGCCATT；ATP8B1‑27‑F：CACCACACCTGGCGAAATATTAA；ATP8B1‑27‑R：ATCATTCTTACCAAACTTCCCATGAG；ATP8B1‑28‑F：GGGGAGTTCATCAGTGTTCATTTC；ATP8B1‑28‑R：ATAGTCCAACCCAAGGAGTTTGTTAT；ABCB4基因：ABCB4‑3F：TAAGGCAGGCGACCATTT；ABCB4‑3R：CTCAAGCAACCCTCCCAC；ABCB4‑4F：CTCCTTTTCTAAGACATTCATTT；ABCB4‑4R：AAGATGGTAATGAATAGCAAAAT；ABCB4‑5F：TAAAGAGAAACTTAACAATAGCATC；ABCB4‑5R：ATAGGTGAATCTGGGTAAAGAGTAC；ABCB4‑6‑F：GGTATTTAATAGAGCCTTTCTC；ABCB4‑6‑R：CCTTGACATATTTTCACACAG；ABCB4‑7F：GTGTTTGTTGGATGTCTACTTCA；ABCB4‑7R：GTGCTGGGATACAGGAATGA；ABCB4‑8F：GAACACTGGCATTTGCTACAT；ABCB4‑8R：GCTTTAGAGTCTGACATTCAACTAT；ABCB4‑9‑F：GGTCTCACCATGGGTTCATT；ABCB4‑9‑R：TCATCTTTCAAAAAGGAGCGA；ABCB4‑10‑F：TAATGAATGCCAGAATGTGAC；ABCB4‑10‑R：TCAAAAATATGCAAACTAAAGCCA；ABCB4‑11/12‑F：ACTTGTTTGTGCTATGATGGAAT；ABCB4‑11/12‑R：AAGGGTGTGAAGGCATTATC；ABCB4‑13‑F：GGATGTTTTTCATGAATGGTCC；ABCB4‑13‑R：TGGACAATCTTGCATCTCAAA；ABCB4‑14F：CTCAGTTAGGGGTTAAAGGATTA；ABCB4‑14R：CATTTGCTATGTTTCTGTTTCTCA；ABCB4‑15‑F：TTTGCCATAATCACGCAGAG；ABCB4‑15‑R：TGCTCAGTATAGCATTCACTGGA；ABCB4‑16F：TTGATTGAGAAGCAGTTAGGAAA；ABCB4‑16R：GTATGGCTCATAGTAGCAGTCATCT；ABCB4‑17‑F：CGAACAACCCATACTCAGCTTATG；ABCB4‑17‑R：GAGGTTGGGAGAAGCAGCAGC；ABCB4‑18F：ATGTGACACTCAAGCCACTATT；ABCB4‑18R：TGAGGGCAAACTTGTAATGT；ABCB4‑19F：GGCAACTGTAAAACAACTCATAACT；ABCB4‑19R：CATCCTTGCGTGAATACCCT；ABCB4‑20F：AGGCTTTGTCTGGTTTTCTTT；ABCB4‑20R：TGGGTATGCTACATGCTTATCTA；ABCB4‑21‑F：AGCCAATGTAGCTCAGGCAT；ABCB4‑21‑R：AGTTGTAGTGGGCACAAACATT；ABCB4‑22F：TAGTCTTGAACAGATTATGCCTT；ABCB4‑22R：CTTGGAGACCTATTCTTGTTGTT；ABCB4‑23F：AAGGAGGCTGAAGAGATGGT；ABCB4‑23R：AGGATGGAAACTGTGGTAAAT；ABCB4‑24F：TATGAAAATGTATGTCGGGG；ABCB4‑24R：TTAAATGTCAGTCAAGTTGCC；ABCB4‑25F：TTATGTTTCTCTACTACAGTCTTTG；ABCB4‑25R：CAGTTGGGGTTTATAGAATGT；ABCB4‑26F：GCTTAATCACCATAAAAATCATCA；ABCB4‑26R：AGGTAGGCATAATGTATTCCCA；ABCB4‑27F：TACCATTGAGAATTAAAGTCACTAG；ABCB4‑27R：TTGAGGCAAGAGAATCGCT；ABCB4‑28F：ATACAATTTTTGGGATAAGGTGTC；ABCB4‑28R：TGATGACAAACCAGAAACTTATT；ABCB11基因：ABCB11‑6‑F：GTAATCTCTGGTGGCTTGATCCTA；ABCB11‑6‑R：TTGTATCCTCCTAAGTTTCCATCTG；ABCB11‑7‑F：AATTACTTTCCCCCTTTTCTCAA；ABCB11‑7‑R：AACATAGGAAAACTGAAAATATTTTTAAAT；ABCB11‑8‑F：TAGGGATAGAGAGATGGGAATGT；ABCB11‑8‑R：GGGAGTAATCTAACAAACTACATGA；ABCB11‑9‑F：CAGACTGACTTACCTAATTTCTTGGACT；ABCB11‑9‑R：AAACATACTGCTAAAGGCTTGGGACT；ABCB11‑10‑F：TCCCTGAAGCTGCTCTGTGTTTG；ABCB11‑10‑R：GAAGGAAATGCTATGTCTCGGTC；ABCB11‑11‑F：GCTACCTTGCTTAGACTTCTTACT；ABCB11‑11‑R：TTCTTCAGGAGTTCATTCTGTGCC；ABCB11‑12‑F：CTAAGAGGCACAATAAATGTATACATCTTCA；ABCB11‑12‑R：GAAACAGAGTCAGGCTTCAGAAAAT；ABCB11‑13‑F：CTCATCCTTGCCAATGTTTCCT；ABCB11‑13‑R：AAGCGTGTCCCATCAATTCAGTA；ABCB11‑14‑F：AGAATCTTATTGGCCTCTATTTTTTCTGC；ABCB11‑14‑R：TTGGGAATCATACGAGAAGAAATGTGTA；ABCB11‑15‑F：GACAGAAAGGACATTATAGTGG；ABCB11‑15‑R：AATCAGACTAGATGCATGAACCC；ABCB11‑16‑F：GATGCAAAGGTCAGTGTCAGCT；ABCB11‑16‑R：TGCCAGAGTTGTTGGGAGAA；ABCB11‑17‑F：GGTTTAAATGACTCAGTCTTGC；ABCB11‑17‑R：TGAGGATTAGGACTACAGAGGA；ABCB11‑18‑F：TACCATGTGACCTACCAAACATTTCTA；ABCB11‑18‑R：CCTAGAAAACTCATATTCTCAGGCTTAA；ABCB11‑19‑F：TGTGAATGCCAAAGGATCTGC；ABCB11‑19‑R：TTGCCTTCTTACCCTCTGTGTG；ABCB11‑20/21‑F：CCACAGCTTACATTAGGGTTCACTC；ABCB11‑20/21‑R：GAATGCTCTAATGAAAGAATGCC；ABCB11‑22‑F：ATATTTTATCACAACTTTATAAAAGGTCTGA；ABCB11‑22‑R：GCTTCCTTCAGTCTCTTCGTACTACT；ABCB11‑23‑F：GCAGCCACTGAAATGTCACGAA；ABCB11‑23‑R：ACCAGGCTATTCCTTCCTTGTGT；ABCB11‑24‑F：ATATTTGGTCCTTTCCTGGCAGAAC；ABCB11‑24‑R：TACCCCACACCATCCCCTGA；ABCB11‑25‑F：TTTGGCAGCATGGTTTGAAGG；ABCB11‑25‑R：GAGTCTGGCAAAGCAAAAACTTGAAG；ABCB11‑26‑F：ATGGATGCCACTCCTGATAGACA；ABCB11‑26‑R：GGATTTTCAGATTAGGGATGCTC；ABCB11‑27‑F：TCACTCACTGTTCCCTAGTTCAA；ABCB11‑27‑R：GCTCTAGATAATTGTCTTTTGG；ABCB11‑28‑F：CATCAACTTTCCATCTTCTCTTTGC；ABCB11‑28‑R：TTGGGTTTTCCCTCATATGGAC。