[发明专利]一种提高聚合酶链式反应特异性的方法有效
| 申请号： | 201510926040.3 | 申请日： | 2015-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN105483117B | 公开（公告）日： | 2019-04-30 |
| 发明（设计）人： | 罗凯;贺智敏;王倩;张志杰;郑国沛 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学附属肿瘤医院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/11;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510095 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高聚合酶链式反应特异性的方法，是在引物对的5’端添加一段与模板非同源且不形成稳定二级结构的序列。其次，还可将5’端加尾引物与复合PCR反应条件结合使用进一步提高反应特异性；所述复合PCR反应条件为：（1）5～10循环的常规PCR反应条件，（2）高温的退火和延伸步骤合并的两步法PCR条件。与普通PCR引物相比，上述加尾引物可有效提高PCR反应特异性但不影响灵敏度，同时引物工作浓度与常规引物一致甚至更低，在使用常规PCR反应条件时即可显著提高PCR特异性，与复合PCR反应条件的组合模式可进一步提高反应特异性。本发明适用于常规PCR、巢式PCR等各类PCR，具有广泛的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 聚合 链式反应 特异性 方法 | ||
【主权项】：
1.一种提高聚合酶链式反应特异性的方法，其特征在于，在所述聚合酶链式反应的引物对的5’端加尾；所述加尾是指在引物对的5’端添加一段与模板非同源且不形成稳定二级结构的序列，只要其不与待扩增的样品高度同源且不会形成引物内或间稳定的二级结构影响PCR扩增即可；所述加尾是指在引物对中的两条引物的5’端均加尾，两条引物加尾的碱基数相同，所述加尾序列的长度为9～20个碱基；所述方法还包括将PCR反应条件由常规的三步法PCR反应条件修改为复合PCR反应条件；所述复合PCR反应条件为：第一个循环阶段采取5～10循环的常规PCR反应条件，第二个循环阶段采用高温的退火和延伸步骤合并的两步法PCR条件；所述退火和延伸的温度相同，均为64～79℃。
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