[发明专利]一种短小芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法

摘要

本发明涉及生物农药与微生物肥料领域，具体公开的是一种含有芽孢萌发剂的短小芽孢杆菌的可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂的原料由下列重量组份组成：短小芽孢杆菌发酵液40‑70份；填料：膨润土20‑30份；润湿剂：聚乙二醇1‑4份；分散剂：十二烷基硫酸钠0.2‑1份；芽孢萌发剂：L‑丙氨酸0.1‑0.5份，2，6‑吡啶二羧酸钙0.1‑0.5份；紫外保护剂：羧甲基纤维素0.5‑2份，β‑糊精0.2‑1份；干燥保护剂：麦芽糖1‑4份，谷氨酸钠0.2‑1份。本发明制备的短小芽孢杆菌可湿性粉剂施入大田后芽孢萌发速度快，萌发率高，可明显提高其肥效与对植物病害的防治效果，减少短小芽孢的用量，降低生产成本。

主权项

1.一种短小芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述短小芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量份组成：短小芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：膨润土20-30份；润湿剂：聚乙二醇 1-4份；分散剂：十二烷基硫酸钠 0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，2，6-吡啶二羧酸钙0.1-0.5份；紫外保护剂：羧甲基纤维素0.5-2份，β-糊精0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-4份，谷氨酸钠0.2-1份。所述短小芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法由以下几步骤组成：一、短小芽孢杆菌发酵液的制备取出菌种保藏管，用NB固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升NB培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至5L大三角瓶中的短小芽孢杆菌液体培养基，装液量为2L，30℃震荡培养16-28小时，检测其菌液浓度，菌液含量超过60亿/毫升，即可作为短小芽孢杆菌种子液；将短小芽孢杆菌种子液接种至1000L的发酵罐中，装液量为600L的发酵培养基，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.6，其后通气量为1：1；开搅拌，转速为160r/min，培养温度前24小时为30℃，其后，每4小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过200亿CFU/ml，即可结束发酵，作为短小芽孢杆菌发酵液；其中，所述NB培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中，所述短小芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，可溶性淀粉8 g/L， 黄豆粉15 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，碳酸钙2 g/L，pH7.2；其中，所述的发酵培养基：葡萄糖5g/L，玉米粉25 g/L， 豆粕粉70 g/L，麸皮10g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，碳酸钙5 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；二、将短小芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：膨润土20-30份；紫外保护剂：羧甲基纤维素0.5-2份，β-糊精0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-4份，谷氨酸钠0.2-1份；混匀后喷雾干燥，得到短小芽孢杆菌粉剂；三、将润湿剂：聚乙二醇 1-4份；分散剂：十二烷基硫酸钠 0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，2，6-吡啶二羧酸钙0.1-0.5份混匀得到短小芽孢杆菌的助剂；四、将步骤二与步骤三所得到的短小芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉碎过400目筛，检测其芽孢含量不低于200亿cfu/g，悬浮率不低于75%，润湿时间不高于85s，水分含量低于5%，真空包装，即为短小芽孢杆菌可湿性粉剂；所述短小芽孢杆菌菌种是从中国农业微生物菌种保藏管理中心购买，编号为ACCC11083。