[发明专利]一种西南凤尾蕨组织培养快速繁殖的方法

摘要

一种西南凤尾蕨组织培养快速繁殖的方法，包括如下步骤：(1)取西南凤尾蕨的成熟孢子作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导出原叶体；(3)将原叶体置于MS诱导培养基中进行壮苗培养获得分化出苗的孢子体；(4)将所述分化出苗的孢子体置于1/2MS生根培养基中进行培养得到完整的生根苗。(5)取完整的生根苗进行炼苗后移栽至育苗大棚。采用本发明所述方法得到的植株粗壮、成活率高，能够在短期内提供大量优质的、适合栽培的西南凤尾蕨种苗，有效的解决西南凤尾蕨规模化育苗的问题。

主权项

一种西南凤尾蕨组织培养快速繁殖的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的选择和消毒：取西南凤尾蕨的成熟孢子作为外植体，将外植体在流水下缓慢冲洗，除去表面的污垢，放入烧杯中，先用2v/v％的洗洁精液浸泡15min后，再用流水冲洗10min，将外植体移至超净工作台上，用75v/v％的酒精表面消毒15s，再用添加了1‑2滴吐温‑20的100ml浓度为0.1v/v％HgC1₂消毒8～15min，无菌水浸泡3次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后进行接种，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；(2)孢子诱导：将步骤(1)得到的外植体接种到MS孢子诱导培养基中，在培养温度为22～28℃，光照强度20～30μmol·m^‑2·s^‑1，光照时间12h·d^‑1，离体诱导20d，孢子萌发获得原叶体，其中MS孢子诱导培养基中添加0.5～1.0mg/L的6‑BA、0.1～2.0mg/L的NAA，30g/L蔗糖，4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)增殖壮苗培养：将步骤(2)得到的原叶体接种到增殖壮苗一体化的MS培养基中，在培养温度为22～28℃，光照强度20～30μmol·m^‑2·s^‑1，光照时间为12h·d^‑1的条件下培养，得到分化出苗的孢子体，所述的增殖壮苗一体化的MS培养基中还添加0.5～2.5mg/L的6‑BA、0.1～2.0mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖，4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)生根培养：将步骤(3)中得到的孢子体接种到1/2MS生根培养基中，在培养温度为22～28℃，光照强度20～30μmol·m^‑2·s^‑1，光照时间为12h·d^‑1的条件下培养，获得根系发达的生根苗，其中1/2MS生根培养基中添加0～0.5mg/L的6‑BA、0～0.5mg/L的NAA，1.0g/L的AC，30g/L蔗糖和4.5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(5)生根苗的炼苗与移栽：将步骤(4)中得到的生根苗放在的大棚内，将瓶盖打开，炼苗3d，取出生根苗，洗净根部的培养基，于阴天傍晚移栽至平整精耕的育苗床上，育苗要求相对湿度为90～95％，温度为23～30℃，光照为自然光，大棚上部覆盖一层遮阳网，遮光度为15～30％。