[发明专利]一组亮氨酸脱氢酶及其编码基因和应用

摘要

本发明公开了一组亮氨酸脱氢酶及其编码基因和应用。本发明首先提供了一组突变体蛋白，为如下(a1)至(a8)中的任意一种：(a1)突变体蛋白3，如序列5所示；(a2)突变体蛋白11，如序列7所示；(a3)突变体蛋白14，如序列9所示；(a4)突变体蛋白15，如序列11所示；(a5)突变体蛋白19，如序列13所示；(a6)突变体蛋白20，如序列15所示；(a7)突变体蛋白25，如序列17所示；(a8)突变体蛋白26，如序列19所示。本发明提供的突变体蛋白，催化效率显著高于现有的亮氨酸脱氢酶，TMP消耗率＝99％时的反应时间短于现有的亮氨酸脱氢酶，特别是突变体蛋白3。本发明对于L‑叔亮氨酸的生产具有重大的应用价值，将产生非常可观的经济效益。

主权项

1.一组突变体蛋白，为如下(a1)至(a29)中的任意一种：(a1)突变体蛋白3，其氨基酸序列如序列表的序列5所示；(a2)突变体蛋白11，其氨基酸序列如序列表的序列7所示；(a3)突变体蛋白14，其氨基酸序列如序列表的序列9所示；(a4)突变体蛋白15，其氨基酸序列如序列表的序列11所示；(a5)突变体蛋白19，其氨基酸序列如序列表的序列13所示；(a6)突变体蛋白20，其氨基酸序列如序列表的序列15所示；(a7)突变体蛋白25，其氨基酸序列如序列表的序列17所示；(a8)突变体蛋白26，其氨基酸序列如序列表的序列19所示；(a9)突变体蛋白1，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V；(a10)突变体蛋白2，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第340位氨基酸残基由E突变为V；(a11)突变体蛋白4，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第238位氨基酸残基由A突变为V；(a12)突变体蛋白5，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第43位氨基酸残基由A突变为V，第76位氨基酸残基由L突变为V，第111位氨基酸残基由I突变为V，第124位氨基酸残基由D突变为E；(a13)突变体蛋白6，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第225位氨基酸残基由E突变为I，第240位氨基酸残基由G突变为L，第261位氨基酸残基由N突变为I；(a14)突变体蛋白7，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第287位氨基酸残基由N突变为I，第358位氨基酸残基由K突变为R；(a15)突变体蛋白8，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第43位氨基酸残基由A突变为V，第334位氨基酸残基由A突变为V；(a16)突变体蛋白9，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第329位氨基酸残基由I突变为V；(a17)突变体蛋白10，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第42位氨基酸残基由G突变为F，第41位氨基酸残基由G突变为V，第44位氨基酸残基由R突变为L，第75位氨基酸残基由N突变为D，第288位氨基酸残基由A突变为E；(a18)突变体蛋白12，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第261位氨基酸残基由N突变为M，第265位氨基酸残基由Q突变为L；(a19)突变体蛋白13，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第146位氨基酸残基由P突变为A，第240位氨基酸残基由G突变为A；(a20)突变体蛋白16，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第94位氨基酸残基由E突变为R，第180位氨基酸残基由G突变为A；(a21)突变体蛋白17，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第160位氨基酸残基由A突变为V，第259位氨基酸残基由S突变为A；(a22)突变体蛋白18，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第42位氨基酸残基由G突变为A，第261位氨基酸残基由N突变为I；(a23)突变体蛋白21，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第53位氨基酸残基由N突变为G，第148位氨基酸残基由P突变为L；(a24)突变体蛋白22，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第182位氨基酸残基由G突变为A，第202位氨基酸残基由T突变为S；(a25)突变体蛋白23，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第240位氨基酸残基由G突变为A，第261位氨基酸残基由N突变为A；(a26)突变体蛋白24，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第297位氨基酸残基由E突变为G，第300位氨基酸残基由G突变为A；(a27)突变体蛋白27，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第183位氨基酸残基由N突变为I，第216位氨基酸残基由F突变为I，第304位氨基酸残基由E突变为V；(a28)突变体蛋白28，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第71位氨基酸残基由A突变为I，第357位氨基酸残基由E突变为A；(a29)突变体蛋白29，与序列表的序列3所示的亮氨酸脱氢酶相比差异如下：第41位氨基酸残基由G突变为V，第258位氨基酸残基由G突变为A，第280位氨基酸残基由Y突变为A。