[发明专利]检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和M1含量的方法

摘要

本发明提出检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和M1含量的预处理方法及检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和M1含量的方法。所述预处理方法包括(1)将所述发酵乳与提取液进行混合；(2)将步骤(1)所得到的混合物进行离心处理，并收集上清液；(3)将所述上清液进行浓缩处理，并利用缓冲液将所述浓缩处理的产物进行定容，以便得到待净化溶液；(4)利用免疫亲和柱对所述待净化溶液进行净化处理，得到洗脱液；以及(5)将所述洗脱液进行浓缩处理，并用乙腈水溶液进行定容，以便得到待测液。本发明的方法具有下列优点的至少之一操作简便、快速、回收率高和灵敏度高。

主权项

一种检测发酵乳中黄曲霉毒素B1和M1含量的方法，其特征在于，包括：(1)称取发酵乳样品10g于50mL离心管中，加入25毫升提取液，得到混合液，将所述混合液高速振荡2min，并将得到的液体在5000转/分钟下离心5分钟，收集上清液，其中所述提取液含有体积比为8:2的乙腈和甲醇；(2)将所述上清液在45‑48摄氏度下旋转蒸发到体积5升，再用磷酸二氢钠缓冲液定容到50毫升并混匀，得到待净化溶液，然后将所述待净化溶液以2mL/min～3mL/min的流速通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，然后用10毫升水以2mL/min～3mL/min的速度淋洗黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，弃流出液，再用6毫升乙腈以2mL/min～3mL/min的速度洗脱黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，得到洗脱液，其中所述磷酸二氢钠缓冲液的pH值为7.4～8.5；(3)将所述洗脱液在氮吹仪下吹干，用乙腈‑水溶液定容到1mL，涡旋混匀，过0.22μm的有机滤膜，用液相色谱‑质谱测定，其中所述乙腈‑水溶液中乙腈和水的体积比1:9，其中(3‑1)质谱条件：电离方式为电喷雾电离，正离子；毛细管电压为3.5kV；锥孔电压为40V；离子源温度为120℃；锥孔反吹气流量为50L/h；脱溶剂气温度为350℃；脱溶剂气流量为500L/h；电子倍增电压为650V；扫描方式为多离子反应监测；针对黄曲霉毒素M1，离子选择参数包括：母离子312.9，子离子240.7和284.6，碰撞能量是38和22，驻留时间是0.05min；针对黄曲霉毒素B1，离子选择参数包括：母离子329.1，子离子259和273，碰撞能量是25和25，驻留时间是0.1min；(3‑2)液相色谱条件：流动相流动速度：0.3mL/min；色谱柱柱温：40℃；试液温度：20℃；进样体积：10μL；流动相：A相，0.1％甲酸溶液；B相，乙腈溶液。