[发明专利]一种川续断皂苷壳聚糖促进骨粉聚乳酸相融合骨料支架的制备方法

摘要

本发明涉及一种川续断皂苷壳聚糖促进骨粉聚乳酸相融合骨料支架的制备方法，属于生物材料制备领域。针对聚乳酸骨料本身缺乏活性的功能团，不易与细胞发生特异性相互作用的识别信号，不利于细胞在材料表面的黏附、增殖以及分化，通过骨粉复合时，与人体产生排异反应的问题，通过将猪骨脱脂脱蛋白处理与川续断皂苷混合制备改性骨粉，随后在壳聚糖包裹作用下，与聚乳酸材料复合，制备一种川续断皂苷壳聚糖促进骨粉聚乳酸相融合骨料支架，改善其与细胞的亲和性，满足细胞在材料上的吸附、增殖及分化的生物学要求，通过天然壳聚糖和川续断皂苷制备骨料支架，绿色环保无污染。

主权项

一种川续断皂苷壳聚糖促进骨粉聚乳酸相融合骨料支架的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）取新鲜猪骨，对其剔除骨膜和表面软组织，用40～50℃温水洗涤3～5次，除去骨髓和血性成分，随后将其切割制备得0.5cm³的骨头小块，随后将其置于甲醇和丙酮按质量比1:1的混合溶液中，在20～30℃下，对其浸泡处理，每隔6～8h后换液一次，使其脱脂处理48h；（2）待脱脂完成后，用质量浓度为10%的过氧化氢溶液浸泡脱蛋白处理22～24h，随后每隔8h换液一次，待脱蛋白完成后，将骨块取出并用蒸馏水洗涤3～5次，随后将其置于60～80℃下干燥6～8h；（3)待干燥完成后，对其碾磨并过筛处理，制备得60～80目的颗粒骨料，随后再在球磨机中，采用无水乙醇为湿磨剂进行湿磨处理2～3h，随后对其过滤并收集滤渣，将其置于80～100℃下干燥3～4h，并将其置于紫外灯下灭菌处理1～2h，制备得脱脂脱蛋白骨粉备用；（4）按重量份数计，选取5～35份壳聚糖粉末、20～40份质量分数为36％的乙酸溶液、30～40份的液体石蜡和15～25份的失水山梨糖醇脂肪酸酯混合配制形成乳化剂，随后缓慢滴加0.8mol/L的NaOH溶液调节pH至8～10，加热升温至60℃反应2～3h，待反应完成后，对其抽滤并收集滤饼，分别用石油醚和丙酮在索式抽提器中抽提20～24h后，取出滤饼在50℃下真空干燥20～30min，制备得壳聚糖微小球；（5）按0.01mol/L的浓度，将川续断皂苷添加至100mL的无水乙醇中，搅拌混合10～15min后，制备得川续断皂苷乙醇溶液中，随后将10g步骤（3）制备的脱脂脱蛋白骨粉加入至川续断皂苷乙醇溶液中，在200～300W的超声分散10～15min，并在30～40℃下干燥3～4h，制备得改性骨粉；（6）按固液质量比1:10，将聚乳酸颗粒溶解至乙酸乙酯中，随后将其置于55～60℃下磁力搅拌25～30min，制备得10%的聚乳酸溶液，随后再按固液质量比1:5，将上述制备的改性骨粉添加至上述制备的聚乳酸溶液中，随后在300～400r/min下，搅拌混合至骨粉颗粒呈凝胶状；（7）待叫搅拌完成后，将其置于铺满步骤（4）制备的壳聚糖微小球模具中，在1200～1500r/min下离心10～15min，随后对其真空干燥20～24h，并将其切成1mm的骨料支架，随后将其置于环己烷溶液中，气浴振荡72h，每隔12h换液一次，随后将其置于40～50℃烘箱中干燥6～8h，即可制备得一种川续断皂苷壳聚糖促进骨粉聚乳酸相融合骨料支架。