[发明专利]一种齿瓣石斛共生种苗的人工繁育方法

摘要

本发明公开了一种齿瓣石斛共生种苗的人工繁育方法。将胶膜菌(Tulasnella sp.)，CGMCC No.9551通过放大发酵培养，过滤菌丝体加适量无菌水并用匀浆机打碎制成真菌悬浮液，加入齿瓣石斛种子制成种子-真菌悬浮液，用椰糠、树叶和树皮制成育苗基质，每平方米基质喷洒50～500ml的种子-真菌悬浮液，并保持育苗基质的含水量在50％～90％，至45天时即可获得大量共生幼苗。本发明能够显著缩短种子成苗时间，降低育苗成本，一次性获得较大量的齿瓣石斛幼苗，提高共生幼苗的生长速度及移植到自然环境中的存活率均要高于非共生萌发幼苗。该方法实现了齿瓣石斛种子获取种苗的新途径，具有重要的现实推广和应用价值。

主权项

一种齿瓣石斛共生种苗的人工繁育方法，包括以下步骤：(1)采集野外自然结实并成熟但果荚尚未开裂的齿瓣石斛种子保存备用；(2)真菌悬浮液的制作：2.1培养基的制作：以锥形瓶10％体积的量将PDA液体培养基装瓶，封口后装入灭菌锅，于121℃，115KPa条件下灭菌20min，备用；2.2将活化培养3～10天的胶膜菌(Tulasnella sp.)，CGMCC No.9551接种于备用的PDA液体培养基，于23～28℃，120～200rpm条件下发酵培养5～10天；2.3用纱布过滤发酵液获取菌丝体，用无菌水冲洗菌丝体3～5次并沥水以去除残留的葡萄糖，将菌丝体和5～50倍质量的无菌水放入匀浆机打碎制成真菌悬浮液；(3)种子‑真菌悬浮液的制作：将齿瓣石斛种子与真菌悬浮液混匀制成种子‑真菌悬浮液，控制种子‑真菌悬浮液中有活力的齿瓣石斛种子密度为20～200个/ml；(4)苗架和苗盘准备：4.1在苗床上方安装荫蔽度为60～90％的遮阴网；4.2将椰糠、树皮和树叶分别用清水浸泡一周，然后按椰糠占基质总体积50％～95％的比例混合均匀，于121℃，115KPa条件下灭菌20min，作为育苗基质；4.3将育苗基质均匀的装入苗盘，厚度1.5～2.0cm，然后在基质表面平铺一块面积略大于苗盘的尼龙网布以防止种子漏出苗盘，尼龙网布的孔径为 20～40μm，在尼龙网布上再均匀覆盖一层厚度0.4～0.6cm的育苗基质，喷水至基质饱和，备用；(5)齿瓣石斛种子与真菌苗圃共生萌发播种：5.1按照每平方米基质喷洒50～500ml的比例将制作好的种子‑真菌悬浮液均匀喷洒在备用的苗盘上；5.224小时后，每天在非太阳直射条件下喷洒雾化水以保持育苗基质的含水量在50％～90％；5.3种子共生萌发至45天时，即可形成共生种苗。