[发明专利]一种脐血淋巴细胞DC-CIK的培养方法

摘要

本发明属于免疫细胞体外培养技术领域，特别公开了一种脐血淋巴细胞DC‑CIK的培养方法。本发明以脐血为处理对象，经过脐血单个核细胞的分离、DC细胞的分离培养、CIK细胞的诱导培养、DC和CIK的共培养制备DO‑DIK细胞，并添加CTLA‑4mAb和PD‑1mAb，最后离心收集成熟的DC‑DIK细胞，得到产品。本发明通过用CD3mAb包被培养瓶，培养前期连续刺激，减少了细胞因子的使用，提高效应细胞群活化效率和扩增效率，同时降低了培养成本。

主权项

一种脐血淋巴细胞DC‑CIK的培养方法，以脐血为原始材料，其特征为，包括如下步骤：(1)从脐血中分离出脐血单个核细胞，重悬于GT‑T551H3培养基中静置培养；(2)从步骤(1)中制得的培养液中吸出悬浮细胞；贴壁细胞加入含有rhGM‑CSF和rhIL‑4的GT‑T551H3培养基，静置培养；第3天半量换GT‑T551H3培养基，并补加rhGM‑CSF和rhIL‑4；第5天加入肿瘤特异性抗原刺激；第6天加入rhTNF‑a，继续培养到第7天，得到DC细胞；(3)吸出的悬浮细胞放入CD3mAb包被过的培养瓶中静置培养，并在培养基中补加IFN‑γ及经灭活过的自体血浆；第2天补GT‑T551H3培养基，同时添加IL‑2和经灭活过的自体血浆；第3天补GT‑T551H3培养基，同时添加IL‑2和％经灭活过的自体血浆；第4天补GT‑T551H3培养基，同时添加IL‑2和经灭活过的自体血浆，培养至第7天，得到CIK细胞；(4)将DC细胞和CIK细胞混合，将混合后的细胞转移至培养袋中，补GT‑T551H3培养基，同时添加IL‑2、经灭活过的自体血浆、CTLA‑4mAb和PD‑1mAb，静置培养5‑7天，得到DC‑CIK细胞；(5)第14天将培养好的DC‑CIK细胞离心收集，并用氯化钠溶液洗涤，再向收集好的细胞中加入人血清白蛋白，并用氯化钠溶液定容，得到产品。