[发明专利]快速高效检测基因组DNA羟甲基化的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201511001306.X | 申请日： | 2015-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN105506084B | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 洪燕;徐护朝;王新然;赵红梅;苏亚磊;玄兆伶;李大为;梁峻彬;陈重建 | 申请（专利权）人： | 安诺优达基因科技（北京）有限公司;浙江安诺优达生物科技有限公司;安诺优达(义乌)医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 闫桑田 |
| 地址： | 100176 北京市北京经济技*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种快速高效地检测基因组DNA羟甲基化的方法及试剂盒。该方法包括：用限制性内切酶MspI酶切基因组DNA，得到酶切片段；在所述酶切片段的两端分别连接P5接头和P7接头，得到加接头的酶切片段；对所述加接头的酶切片段进行糖基化处理，使其中的羟甲基化碱基转化为糖基羟甲基化碱基，得到包含糖基羟甲基化碱基的酶切片段；将所述包含糖基羟甲基化碱基的酶切片段再次用限制性内切酶MspI酶切，得到二次酶切产物；对所述二次酶切产物进行PCR扩增，得到测序用DNA文库；以及，对所述测序用DNA文库进行二代测序。与传统的RRHP方法相比，该方法无需使用包含双脱氧核糖核苷酸的接头。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 高效 检测 基因组 dna 甲基化 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种检测基因组DNA羟甲基化的方法，其是RRHP方法的替代方法，该方法包括：步骤A：用限制性内切酶MspI酶切基因组DNA，得到酶切片段；步骤B：在所述酶切片段的两端分别连接P5接头和P7接头，得到加接头的酶切片段，所述P5接头是SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列的退火产物，所述P7接头是SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列的退火产物；步骤C：对所述加接头的酶切片段进行糖基化处理，使其中的羟甲基化碱基转化为糖基羟甲基化碱基，得到包含糖基羟甲基化碱基的酶切片段，其中，所述羟甲基化碱基是5‑羟甲基胞嘧啶，所述糖基化处理使用β葡萄糖基转移酶进行；步骤D：将所述包含糖基羟甲基化碱基的酶切片段再次用限制性内切酶MspI酶切，得到二次酶切产物；步骤E：对所述二次酶切产物进行PCR扩增，得到测序用DNA文库；以及步骤F：对所述测序用DNA文库进行二代测序，基于测序结果，对所述基因组DNA的羟甲基化情况进行分析；该方法不用于人类及动物疾病诊断。
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