[发明专利]一种缢蛏血管紧张素转换酶抑制肽制备方法

摘要

本发明公开了一种缢蛏血管紧张素转换酶抑制肽制备方法，包括以下步骤：（1）缢蛏预处理；（2）酶解；（3）超滤分离；（4）快速蛋白纯化系统分离纯化；（5）高效液相色谱系统分离纯化。本发明以缢蛏为原料，通过中性蛋白酶酶解缢蛏，并利用超滤技术、快速蛋白纯化系统和高效液相色谱系统对酶解液进行分离纯化后得到一种新的血管紧张素转换酶抑制肽（ACE抑制肽），提取分离工艺合理，可操作性强，为从缢蛏中制备高活性的ACE抑制肽提供了实验依据。

主权项

一种缢蛏血管紧张素转换酶抑制肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）缢蛏预处理：将缢蛏除壳剥肉后，用清水把蛤肉洗净，经高速组织搅碎机匀浆后，用异丙醇浸泡缢蛏肉3~5h，过滤后滤渣用纯化水泡洗至无异丙醇异味，脱水得缢蛏肉渣，备用；（2）酶解：将步骤（1）中的缢蛏肉渣加入中性蛋白酶进行酶解，酶解条件为：料液比1：3~4，加酶量1500~2000U/g，pH 值6.5~7.5，酶解温度50~60℃，酶解时间9~12 h，酶解完成后用沸水浴灭活，预冷后离心，得上清液；（3）超滤分离：将上清液经0.45μm滤膜抽滤后，用截留分子量为3 ku的超滤膜进行超滤，得到超滤液；（4）快速蛋白纯化系统分离纯化：将步骤（3）中的超滤液经快速蛋白纯化系统进行分离纯化，得到二个活性组分，分别取样测定该二个活性组分的血管紧张素转换酶抑制活性，取血管紧张素转换酶抑制活性最高的组分记为组分A；（5）高效液相色谱系统分离纯化：将组分A经高效液相色谱系统（HPLC）分离纯化，得到三个活性组分，分别取样测定该三个活性组分的血管紧张素转换酶抑制活性，取血管紧张素转换酶抑制活性最高的组分记为组分B，组分B经纯度检测后，即得氨基酸序列为：Pro‑Trp ‑ Gly ‑ Met ‑ Phe（PTGMP）的血管紧张素转换酶抑制肽。