[发明专利]一种肠道病毒三重直接荧光RT-PCR的检测试剂盒和反应体系

摘要

本发明公开了一种肠道病毒通用型、CA16型、EV71型三重直接荧光RT‑PCR的检测试剂盒和反应体系。本发明的检测试剂盒包括引物和探针分子，其碱基序列为SEQ ID NO：1‑9，能够同时检测肠道病毒通用型、CA16型和EV71型。使用本发明的试剂盒，可以直接将样本加入反应管内进行检测，而不需要纯化RNA这一繁琐的步骤，减少了操作步骤，可以快速、准确检测肠道病毒通用型，缩短检测时间，提高检测效率，节省成本，同时可以有效地降低交叉污染的风险。

主权项

1.一种肠道病毒通用型、CA16型、EV71型三重直接荧光RT‑PCR的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：两条用于检测肠道病毒通用型的引物，其碱基序列分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；一条用于检测肠道病毒通用型的探针，其碱基序列为SEQ ID NO：3；其中SEQ ID NO：3的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；两条用于检测肠道病毒CA16型的引物，其碱基序列分别为SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；一条用于检测肠道病毒CA16型的探针，其碱基序列为SEQ ID NO：6；其中SEQ ID NO：6的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；两条用于检测肠道病毒EV71型的引物，其碱基序列分别为SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8；一条用于检测肠道病毒EV71型的探针，其碱基序列为SEQ ID NO：9；其中SEQ ID NO：9的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；所述探针SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：9的荧光报告基团互不相同；所述试剂盒还包括：直接RT‑PCR反应液，所述直接RT‑PCR反应液包括Tris‑HCl、硫酸铵、氯化钾、Triton X‑100、氯化镁、dNTPs混合物和PCR增强剂，其中Tris‑HCl的浓度为20mmol/L～110mmol/L；硫酸铵的浓度为10mmol/L～40mmol/L；氯化钾的浓度为60mmol/L～120mmol/L；Triton X‑100的体积百分含量为0.02%～3%；氯化镁的浓度为4mmol/L～10mmol/L；dNTPs混合物中每种dNTP的浓度为2.5mmol/L～5mmol/L；PCR增强剂的浓度为2mmol/L～10mmol/L。