[发明专利]一种登革热微针疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种新型登革热微针疫苗及其制备方法，经过病毒的培养、病毒浓缩、病毒灭活等制得灭活病毒疫苗，再通过制备反转模具、制备微针等制得新型登革热微针疫苗。本发明制得的是可溶性微针无痛疫苗，不会产生疼痛感，而且比皮下注射更安全。将灭活抗原通过注射器注射到肌肉内，微针注射将抗原投递到具有丰富免疫信号细胞的皮肤内，拥有更好的疫苗投递效果。固体形态的微针可包裹药物在室温下保存，无需冷藏，与液体注射药物相比，大大降低了运输和存储成本。

主权项

1.一种登革热微针疫苗的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：一、灭活病毒疫苗的制备首先进行病毒的培养，采用单层培养的Vero细胞，加入已作10倍‑100倍稀释的病毒液，将种毒瓶放入28℃培养箱培养lh，然后将其置入无菌间，在种毒瓶中加入RPMI‑1640维持培养液，再在28℃培养箱培养，当88‑92％的Vero 细胞出现CPE后，进行收毒，收毒采用反复冻融的方法；将收毒后的病毒液进行离心处理，取上清液；所述反复冻融的方法是将培养瓶在‑20℃的条件下冻住，然后融化，反复重复3‑5次；病毒浓缩：将上述上清液进行过滤，然后用分子量1000K的超滤膜进行超滤浓缩，用0.01M的PBS作最后浓缩，浓缩液中再加入 0.25mo1/L PB回收病毒液；病毒灭活：取上述病毒液，加入灭活剂于4℃进行灭活，制得灭活病毒疫苗，也称为DV病毒疫苗；灭活剂采用质量浓度为0.0625％的甲醛或质量浓度为0.1％的BeI；BeI的灭活时间在24‑36h；甲醛的灭活时间在3‑6h；二、微针制备制备反转模具：取微针针体的母模模具，取预聚合的聚二甲基硅氧烷和交联剂的混合物并覆盖在母模模具上，在温度为80℃下放置28‑32分钟，得到反转模具；分别将负载有台盼蓝和CpGOND的中空阳离子脂质体纳米颗粒与DV病毒疫苗混匀，冻干；再加水水合且在45℃下搅拌，得到负载DV病毒疫苗的中空阳离子脂质体纳米颗粒即Lip‑DV；将Lip‑DV加入到HA水溶液中，得到针体制作液；所述预聚合的聚二甲基硅氧烷和交联剂的质量比为8‑12:1；所述中空阳离子脂质体纳米颗粒与DV病毒疫苗的质量比为4‑6:1；HA水溶液中HA的重量含量为4‑6％；所述Lip‑DV在针体制作液中所占的重量含量为2.5‑3.5％；所述中空阳离子脂质体纳米颗粒的制备：将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二甲基三十六烷基铵和胆固醇按照摩尔比为2:1:1的比例搅拌混合溶于酒精中，50℃下加热溶解，继续搅拌蒸馏掉酒精得到脂质层；然后加水水合，并在50℃下搅拌均匀，再经过均质机挤压得到中空阳离子脂质体纳米颗粒；制备微针：将Cs、HA与水混合溶解得到作为背衬制作液，然后倒入上述反转模具中静置；再置于密闭容器中，在2‑4倍大气压下作用2‑5分钟；然后将覆盖有背衬制作液的反转模具自然晾干，即得新型登革热微针疫苗；背衬制作液中Cs:HA:水的重量比为1:1‑2:3。