[发明专利]猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT-PCR检测引物及检测方法

摘要

本发明涉及一种病毒的检测方法，具体涉及一种猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR检测引物及检测方法。本发明利用引物检测猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR的方法，该方法不用于疾病的诊断和治疗，包括提取病毒的DNA后，按多重荧光定量RT‑PCR反应体系和反应条件对病毒进行检测，本发明的57份临床样品的多重RT‑PCR检测结果显示，同时感染这2种病毒的阳性率为1.75％，感染PDCoV阳性率为19.30％，感染TGEV阳性率为1.75％。结果表明，建立多重RT‑PCR方法能够对PDCoV和TGEV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

主权项

1.一种检测猪德尔塔冠状病毒和猪传染性胃肠炎病毒多重RT‑PCR 的方法，该方法不用于疾病的诊断和治疗，包括提取病毒的RNA后，按如下多重荧光定量 RT‑PCR反应体系和反应条件对病毒进行检测，其特征在于：所述多重荧光定量RT‑PCR反应体系，在25μl体系中加入以下成份：所述反应条件为：95℃5min，94℃1min，58℃30s，72℃30s，35个循环，72℃延 伸10min；所述猪德尔塔冠状病毒的引物序列如下：上游引物P1：5＇‑ATGGCTACTGGCTGCGTTAC‑3＇下游引物P2：5＇‑GCGTTTCCTGGGCTGATT‑3＇扩增猪德尔塔冠状病毒基因部分片段383bp；猪传染性胃肠炎病毒的引物序列如下：上游引物P3：5＇‑CCCTCCAGCAAGGTTCAA‑3＇下游引物P4：5＇‑GCAACCCAGACAACTCCA‑3＇扩增猪传染性胃肠炎病毒基因部分片段229bp。