[发明专利]一种快速测定透明质酸酶活性的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定透明质酸酶活性的方法，包括以下步骤：(1)采用醋酸钠醋酸缓冲液配制透明质酸溶液，溶液pH值：3<pH≤7；(2)配制十六烷基三甲基溴化铵溶液；(3)取步骤(1)的透明质酸溶液，加入透明质酸酶溶液在37℃反应0.5～1小时，加入十六烷基三甲基溴化铵溶液后37℃下继续反应8～15分钟，获得样品溶液；(4)制备对照溶液：取步骤(1)的透明质酸溶液，加入十六烷基三甲基溴化铵溶液，37℃下反应8～15分钟，获得对照溶液；(5)采用酶标仪在波长400nm下测定对样品溶液和对照溶液的光密度值；(6)根据所获得的样品溶液和对照溶液的光密度值采用计算获得透明质酸酶的活力及比活力。该方法操作简单，稳定性好，灵敏度和可重复性高，为透明质酸酶的规模化提取、制备及应用奠定基础。

主权项

一种快速测定透明质酸酶活性的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)配制透明质酸溶液：采用醋酸钠缓冲液配制透明质酸溶液，溶液pH为：3<pH≤7；(2)配制十六烷基三甲基溴化铵溶液；(3)制备样品溶液：取步骤(1)的透明质酸溶液，加入透明质酸酶溶液在37℃反应0.5～1小时，加入十六烷基三甲基溴化铵溶液后37℃下继续反应8～15分钟，获得样品溶液；(4)制备对照溶液：取步骤(1)的透明质酸溶液，加入十六烷基三甲基溴化铵溶液，37℃下反应8～15分钟，获得对照溶液；(5)测定光密度值：采用酶标仪在波长400nm下测定对样品溶液和对照溶液的光密度值；(6)计算结果：根据所获得的样品溶液和对照溶液的光密度值采用下式计算获得透明质酸酶的活力及比活力，A_对照为对照溶液的光密度值，A_酶为样品溶液的光密度值，浓度为样品溶液的浓度，加样量为样品溶液的加样量。