[发明专利]从外周血提取免疫细胞的方法

摘要

本发明公开了一种从外周血提取免疫细胞的方法，属于生物技术领域。本发明包括如下步骤：外周血的预处理：将加入抗凝剂的外周血移入离心管中，750g，10min离心，吸取上层血浆备用，下层细胞加入等体积的PBS溶液，混匀获得细胞悬液；将含有海藻糖，超低粘度海藻酸钠和泛影酸钠的分离液加入到离心管中；将所述细胞悬液平铺到所述离心液上，在8‑25℃，500g‑800g，10～30min条件下离心，吸取白膜层细胞获得免疫细胞；将所述免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀，分装于细胞冻存管中，将所述细胞冻存管放置于程序冻存盒中，先于‑80℃冷冻，然后转入液氮中冻存。本发明配方中的全部原料均符合静注级原料药标准。

主权项

1.一种从外周血提取免疫细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)外周血的预处理：将加入抗凝剂的外周血移入离心管中，750g，10min离心，吸取上层血浆备用，下层细胞加入等体积的PBS溶液，混匀获得细胞悬液；2)将含有海藻糖，超低粘度海藻酸钠和泛影葡胺的分离液加入到离心管中，所述分离液的制备方法为：将符合药用标准的右旋糖酐3～5重量份，海藻糖2～4重量份，超低粘度海藻酸钠0.3～0.8重量份，泛影葡胺1～3重量份和聚二烯丙基二甲基氯化铵0.1～0.15重量份充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液100重量份，再经过0.22μm滤膜过滤制得分离液；3)将所述细胞悬液平铺到所述离心液上，在8‑25℃，500g‑800g，10～30min条件下离心，吸取白膜层细胞获得免疫细胞；4)将所述免疫细胞等体积加入到冻存液中混匀，分装于细胞冻存管中，将所述细胞冻存管放置于程序冻存盒中，先于‑80℃冷冻，然后转入液氮中冻存；其中，所述步骤4)中冻存液的配方为10％DMSO+5％右旋糖酐+5％海藻糖+18％所述上层血浆+62％注射用生理盐水的混合溶液；所述分离液的密度为1.070～1.090g/cm³，渗透压为275～300smol/kg，pH为6～9，粘度为3.0～5.0cp。