[发明专利]一种高效表达人促卵泡激素的CHO细胞的培养方法

摘要

本发明公开了一种高效表达人促卵泡激素的CHO细胞的培养方法，属于生物制药技术领域。本发明所提供的培养方法是将种子细胞配制成细胞悬液，在利用无血清基础培养基重悬后进行传代培养，获得种子悬液，再将所得的种子悬液接种到生物反应器中进行培养，培养过程中定期流加无血清补充培养基，并监测细胞生长情况并补充葡萄糖溶液，培养结束后收获细胞。本发明所提供的方法全程采用无血清悬浮培养，摇瓶复苏、扩增后转入发酵罐培养，工艺流程简单，并且细胞培养密度大，可达到4×10⁷个/mL，细胞活率达到98％以上，在高密度和高活率下维持时间长，终产物收率可达到40mg/L，适合工业化生产。

主权项

1.一种高效表达人促卵泡激素的CHO细胞的培养方法，其特征在于，具体步骤如下：1)将低温保存的重组CHO细胞取出后在37℃水浴融化后离心留取沉淀，再利用无血清基础培养基重悬，获得种子细胞溶液；2)利用无血清基础培养基传代培养步骤1)所得的种子细胞，培养条件为：转速120rpm，温度37℃，湿度75％，CO₂浓度5％，培养7天经过4级传代培养后获得细胞悬液；步骤1)和步骤2)所用无血清基础培养基是由18g/L CD‑CHO培养基、3.5g/LSFM4 CHO培养基、0.2mM的甲硫氨酸、0.3g/L的碳酸氢钠和1.0g/L的F68组成，pH7.2，渗透压340mOsmol·kg^‑1；将步骤2)所得的细胞悬液接种到生物反应中进行培养，反应器体积为3L，接种细胞密度为5ⅹ10⁵个/mL，初始培养条件为：转速150rpm，溶氧40％，温度37℃，pH值7.2，在培养的第4，6和8天分别补充10％的无血清补料培养基，培养的第7天将温度调节为33℃；培养过程中检测细胞生长情况，并补充葡萄糖溶液使培养液中葡萄糖含量不低于1g/mL；所用无血清补料培养基由40g/L的Feed B培养基、20g/L Feed C培养基和2mM甲硫氨酸组成，pH7.0‑7.2，渗透压800‑1000mOsmol·kg^‑1；培养过程控制细胞活率在90％以上；3)细胞活率低于90％时，培养结束收获细胞。