[发明专利]自身癌抗原特异性CD8+ T细胞的分离及增殖方法

摘要

本发明涉及自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离及增殖方法，详细地涉及如下方法及利用其的CD8+T细胞的大量增殖方法，在上述方法中，从存在于癌症患者每个人的血液内的自身癌抗原筛选由CD8+T细胞识别的表位，并利用已筛选的表位的肽来分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。根据本发明，利用作为非外来抗原的存在于癌症患者的每个人的血液的自身癌抗原CD8+T细胞表位的肽来可分离对自身癌抗原特异性的CD8+T细胞。因此，若利用识别自身癌抗原的T细胞，则可有效地选择来源于癌症患者本人的细胞的癌细胞来去除，因而可无副作用地应用于癌症的治疗及改善。

主权项

1.一种自身癌抗原特异性CD8+T细胞的分离和大量培养的方法，其特征在于，包括：步骤a)，筛选存在于癌症患者血液内的自身癌抗原的CD8+T细胞表位，其中所述自身癌抗原选自由人端粒酶逆转录酶、WT1、NY‑ESO1及黑素瘤抗原‑A3组成的组中；步骤b)，与上述表位的肽及白细胞介素‑2一同，在培养基中培养从癌症患者的血液中分离的外周血单个核细胞；步骤c)，在培养的上述外周血单个核细胞中添加与步骤b)相同的肽来诱导4‑1BB表达；步骤d)，在涂敷有抗‑4‑1BB抗体的培养板中孵育诱导了4‑1BB表达的细胞之后，去除未附着的细胞；步骤e)，将在步骤d)中分离的自身癌抗原特异性CD8+T细胞和经照射的同种异体的外周血单个核细胞，悬浮在含白细胞介素‑2、抗‑CD3的抗体和自体血浆的培养基中；以及步骤f)，通过追加注入培养基，大量培养步骤e)中的自身癌抗原特异性CD8+T细胞，其中，步骤a)的筛选表位包括：a‑1)，在由人端粒酶逆转录酶、WT1、NY‑ESO1及黑素瘤抗原‑A3组成的组中，筛选步骤a)的患者的适当的自身癌抗原类型；a‑2)，收集步骤a)的患者的HLA‑A型或状态的数据；a‑3)，使用来自步骤a‑1)和步骤a‑2)的信息，通过算法选择适当的CD8+T细胞表位；a‑4)，合成在步骤a‑3)中的各表位的肽；a‑5)，在含步骤a‑4)中的各肽和IL‑2的CTL培养基中，培养患者的外周血单个核细胞；a‑6)，通过添加与步骤a‑4)中相同的肽，诱导所培养的细胞中的4‑1BB的表达；a‑7)，使用流式细胞仪，分析在步骤a‑6)中收集的细胞上的4‑1BB+和CD8+的比率；及a‑8)，选择诱导高4‑1BB表达的一种或多种肽作为步骤a)中的患者的CD8+T细胞表位。