[发明专利]一种富集循环肿瘤DNA的方法和试剂有效
| 申请号： | 201580006707.6 | 申请日： | 2015-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN106103742B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 许明炎;张晓妮 | 申请（专利权）人： | 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/686;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 44281 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 | 代理人： | 彭家恩;彭愿洁 |
| 地址： | 518055 广东省深圳市南山区西丽大学城学苑大道1*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种富集循环肿瘤DNA的方法和试剂，所述方法包括如下步骤：将水相和油相混合、振荡配成乳液PCR反应体系并进行乳液PCR扩增，其中水相中含有作为模板DNA的外周血液血浆DNA、正反向引物、dNTPs、PCR缓冲液和DNA聚合酶，外周血液血浆DNA的两端连有接头序列，正反向引物分别与两端的接头序列互补配对；乳液PCR扩增后，分离水相和油相，得到水相的PCR扩增产物；使用特异性结合循环肿瘤DNA的探针序列捕获水相的PCR扩增产物中的循环肿瘤DNA。本发明的方法能够有效地捕获外周血液血浆中的ctDNA，并且进行单分子高保真超微量平行扩增，提供了足够量ctDNA以进行后续的测序检测使用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 富集 循环 肿瘤 dna 方法 试剂 | ||
【主权项】：
1.一种富集循环肿瘤DNA的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n单分子平行扩增：将水相和油相混合、振荡配成乳液PCR反应体系并进行乳液PCR扩增，其中所述水相中含有作为模板DNA的外周血液血浆DNA、正反向引物、dNTPs、PCR缓冲液和DNA聚合酶，所述外周血液血浆DNA的两端连有接头序列，所述正反向引物分别与两端的接头序列互补配对，所述乳液PCR反应体系的水相中还含有dUTP，所述dUTP与所述dNTPs的摩尔比为1∶1000～1∶10；/n分离水相和油相：所述乳液PCR扩增后，分离水相和油相，得到水相的PCR扩增产物；/n捕获循环肿瘤DNA：使用特异性结合循环肿瘤DNA的探针序列捕获所述水相的PCR扩增产物中的循环肿瘤DNA。/n
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