[发明专利]具有抗鞘翅目昆虫活性的杀虫毒素蛋白

摘要

本发明总体上涉及昆虫抑制性毒素蛋白的领域。公开了展现针对农作物和种子的农业相关害虫的昆虫抑制活性的一类新颖的蛋白质。杀虫活性针对鞘翅目的昆虫害虫特别有效。提供含有编码本文公开的毒素蛋白中的一种或多种的多核苷酸构建体的植物、植物部分和种子。所述蛋白质在本文分别称为TIC2463相关毒素蛋白类别或家族、TIC2463相关毒素蛋白、TIC2463相关蛋白属、与TIC2463毒素蛋白相关的毒素蛋白、与TIC2463相关的蛋白质、TIC2463相关毒素多肽、TIC2463相关杀虫蛋白等。

主权项

一种重组核酸分子，其任选地包含：a)异源启动子，所述异源启动子可操作地连接至具有选自由以下组成的组的核苷酸序列的多核苷酸区段：SEQ ID NO:1从位置100‑945、SEQ ID NO:3从位置100‑939、SEQ ID NO:5从位置85‑1011、SEQ ID NO:7从位置94‑948、SEQ ID NO:9从位置79‑978、SEQ ID NO:11从位置100‑942、SEQ ID NO:13从位置100‑939、SEQ ID NO:15从位置100‑939、SEQ ID NO:17从位置85‑1011、SEQ ID NO:19从位置85‑1011、SEQ ID NO:21从位置79‑978、SEQ ID NO:23从位置79‑978、SEQ ID NO:25从位置100‑963、SEQ ID NO:27从位置100‑963、SEQ ID NO:29从位置100‑963、SEQ ID NO:31从位置1‑846、SEQ ID NO:33从位置1‑843、SEQ ID NO:35从位置226‑1065、SEQ ID NO:37从位置187‑1023、SEQ ID NO:39从位置1‑846、SEQ ID NO:41从位置100‑939且具有占据位置781‑783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密码子、SEQ ID NO:43从位置100‑945、SEQ ID NO:44从位置100‑939、SEQ ID NO:45从位置85‑1011、SEQ ID NO:46从位置94‑948、SEQ ID NO:47从位置79‑978、SEQ ID NO:48从位置1‑852、SEQ ID NO:50从位置1‑852、SEQ ID NO:52从位置1‑852、SEQ ID NO:54从位置1‑933、SEQ ID NO:56从位置100‑939、SEQ ID NO:58从位置100‑939以及SEQ ID NO:60从位置100‑939；b)异源启动子，所述异源启动子可操作地连接至编码杀虫多肽的多核苷酸区段，所述杀虫多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61；c)异源启动子，所述异源启动子可操作地连接至编码杀虫多肽的多核苷酸区段，所述杀虫多肽包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；以及d)异源启动子，所述异源启动子可操作地连接至编码具有杀虫活性的多肽的多核苷酸区段；其中所述多核苷酸区段在严格杂交条件下与具有如在a)中的任何序列中列出的核苷酸序列的DNA杂交；并且其中所述杂交条件包括在50％甲酰胺、1M NaCl和1％SDS中在37℃下杂交4至12小时，以及在60℃至约65℃下在0.1x SSC中的洗涤；或一种展示杀虫活性的重组多肽，所述重组多肽选自由以下组成的组：a)多肽，其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列；b)多肽，其包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％‑100％(包括44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；c)多肽，其由如在以下中的任一个中列出的核苷酸序列编码：SEQ ID NO:1从位置100‑945、SEQ ID NO:3从位置100‑939、SEQ ID NO:5从位置85‑1011、SEQ ID NO:7从位置94‑948、SEQ ID NO:9从位置79‑978、SEQ ID NO:11从位置100‑942、SEQ ID NO:13从位置100‑939、SEQ ID NO:15从位置100‑939、SEQ ID NO:17从位置85‑1011、SEQ ID NO:19从位置85‑1011、SEQ ID NO:21从位置79‑978、SEQ ID NO:23从位置79‑978、SEQ ID NO:25从位置100‑963、SEQ ID NO:27从位置100‑963、SEQ ID NO:29从位置100‑963、SEQ ID NO:31从位置1‑846、SEQ ID NO:33从位置1‑843、SEQ ID NO:35从位置226‑1065、SEQ ID NO:37从位置187‑1023、SEQ ID NO:39从位置1‑846、SEQ ID NO:41从位置100‑939且具有占据位置781‑783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密码子、SEQ ID NO:43从位置100‑945、SEQ ID NO:44从位置100‑939、SEQ ID NO:45从位置85‑1011、SEQ ID NO:46从位置94‑948、SEQ ID NO:47从位置79‑978、SEQ ID NO:48从位置1‑852、SEQ ID NO:50从位置1‑852、SEQ ID NO:52从位置1‑852、SEQ ID NO:54从位置1‑933、SEQ ID NO:56从位置100‑939、SEQ ID NO:58从位置100‑939或SEQ ID NO:60从位置100‑939；以及d)多肽，其由在严格杂交条件下与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一个的核苷酸序列的补体杂交的核苷酸序列编码；其中所述杂交条件包括在50％甲酰胺、1M NaCl和1％SDS中在37C下杂交4至12小时，以及在60C‑65C下在0.1x SSC中的洗涤；或一种组合物，其包含展示杀虫活性且具有异源氨基酸序列的重组多肽，其中所述重组多肽选自由以下组成的组：a)多肽，其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列；b)多肽，其包含与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％‑100％(包括44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；c)多肽，其由如在以下中的任一个中列出的核苷酸序列编码：SEQ ID NO:1从位置100‑945、SEQ ID NO:3从位置100‑939、SEQ ID NO:5从位置85‑1011、SEQ ID NO:7从位置94‑948、SEQ ID NO:9从位置79‑978、SEQ ID NO:11从位置100‑942、SEQ ID NO:13从位置100‑939、SEQ ID NO:15从位置100‑939、SEQ ID NO:17从位置85‑1011、SEQ ID NO:19从位置85‑1011、SEQ ID NO:21从位置79‑978、SEQ ID NO:23从位置79‑978、SEQ ID NO:25从位置100‑963、SEQ ID NO:27从位置100‑963、SEQ ID NO:29从位置100‑963、SEQ ID NO:31从位置1‑846、SEQ ID NO:33从位置1‑843、SEQ ID NO:35从位置226‑1065、SEQ ID NO:37从位置187‑1023、SEQ ID NO:39从位置1‑846、SEQ ID NO:41从位置100‑939且具有占据位置781‑783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密码子、SEQ ID NO:43从位置100‑945、SEQ ID NO:44从位置100‑939、SEQ ID NO:45从位置85‑1011、SEQ ID NO:46从位置94‑948、SEQ ID NO:47从位置79‑978、SEQ ID NO:48从位置1‑852、SEQ ID NO:50从位置1‑852、SEQ ID NO:52从位置1‑852、SEQ ID NO:54从位置1‑933、SEQ ID NO:56从位置100‑939、SEQ ID NO:58从位置100‑939或SEQ ID NO:60从位置100‑939；以及d)多肽，其由在严格杂交条件下与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一个的核苷酸序列的补体杂交的核苷酸序列编码；其中所述杂交条件包括在50％甲酰胺、1M NaCl和1％SDS中在37C下杂交4至12小时，以及在60C‑65C下在0.1x SSC中的洗涤；或一种用于控制鞘翅目害虫侵扰的杀虫多肽，其中所述杀虫多肽任选地：a)具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61；或b)展示与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％‑100％(包括44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或一种植物，其具有稳定地并入其基因组的DNA构建体，所述DNA构建体包含编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列，其中所述蛋白质任选地：a)具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61；或b)展示与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％‑100％(包括44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或一种种子，其具有稳定地并入其基因组的DNA构建体，所述DNA构建体包含编码具有杀虫活性的蛋白质的核苷酸序列，其中所述蛋白质任选地：a)具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61；或b)展示与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一个的氨基酸序列具有至少44％‑100％(包括44％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列。