[发明专利]基于杂交链式反应(HCR)的检测的邻近试验

摘要

本发明提供一种用于检测样品中的分析物的方法，所述方法包括a)使所述样品与包括至少第一和第二邻近探针的一组邻近探针接触，所述探针每个包括能够直接或间接结合所述分析物的分析物结合结构域和核酸结构域，从而所述邻近探针可以同时直接或间接结合所述分析物，其中i)所述第一和第二邻近探针的所述核酸结构域包括能够在允许条件下介导涉及所述结构域的相互作用的区域；并且ii)所述第一和第二探针中的一个的所述核酸结构域包括HCR起始子区域，所述HCR起始子区域包括在亚稳定的二级结构内，从而在从所述亚稳定的二级结构释放之前，所述HCR起始子区域不能起始HCR反应；b)引入允许条件以当所述探针两者均已直接或间接结合所述分析物时，允许所述第一和第二探针的所述核酸结构域彼此相互作用，其中所述相互作用使得所述第一或第二探针的所述核酸结构域的所述亚稳定的二级结构解折叠，以释放单链HCR起始子区域；c)使用至少两个HCR单体进行HCR反应，其中所述第一HCR单体包括所述HCR起始子区域的互补性区域，并且所述HCR起始子区域与所述第一HCR聚合物的杂交使所述HCR反应开始，以形成聚合物；以及d)检测所述聚合物，由此检测所述分析物。

主权项

1.一种用于检测样品中的分析物的方法，所述方法包括：/na.使所述样品与包括至少第一邻近探针和第二邻近探针的一组邻近探针接触，所述第一邻近探针和所述第二邻近探针每个包括能够直接或间接结合所述分析物的分析物结合结构域和核酸结构域，从而所述第一邻近探针和所述第二邻近探针可以同时直接或间接结合所述分析物，其中，/ni.所述第一邻近探针的所述核酸结构域包括与所述第二邻近探针的所述核酸结构域中的关联第二互补性区域互补的第一互补性区域，其中所述第一互补性区域包括在亚稳定的二级结构内，从而在从所述亚稳定的二级结构释放之前，所述第一互补性区域不能与所述关联第二互补性区域杂交；并且/nii.所述第二邻近探针中的所述核酸结构域包括HCR起始子区域，所述HCR起始子区域包括在亚稳定的二级结构内，从而在从所述亚稳定的二级结构释放之前，所述HCR起始子区域不能起始HCR反应；/nb.引入激活寡核苷酸，所述激活寡核苷酸包括与所述第一邻近探针的所述核酸结构域中可用的关联互补性区域互补的互补性区域，其中所述激活寡核苷酸与所述第一邻近探针的所述核酸结构域杂交，使所述亚稳定的二级结构解折叠并且使所述第一互补性区域暴露，当所述第一邻近探针和所述第二邻近探针两者均已直接或间接结合所述分析物时，所述第一互补性区域与所述第二邻近探针中的所述关联第二互补性区域杂交，从而使得所述第二邻近探针的所述核酸结构域的所述亚稳定的二级结构解折叠，以释放单链HCR起始子区域；/nc.使用至少两个HCR单体进行HCR反应，其中第一HCR单体包括所述HCR起始子区域的互补性区域，并且所述HCR起始子区域与所述第一HCR单体的杂交使所述HCR反应开始，以形成聚合物；/nd.检测所述聚合物，由此检测所述分析物。/n