[发明专利]使用模板转换和标签化的多重单细胞基因表达分析

摘要

本文提供用于多重单细胞基因表达分析的方法和组合物。一些方法和组合物包括具有诸如唯一性分子条形码(UMI)的唯一性条形码的小滴和/或珠粒的使用。

主权项

一种从多个单细胞制备cDNA文库的方法，所述方法包括以下步骤：从每个单细胞中释放mRNA以提供多个单独的mRNA样品，其中每个单独的mRNA样品中的所述mRNA来自单细胞；用第一链合成引物从每个单独的mRNA样品中的所述mRNA合成cDNA的第一链，并且将标签并入所述cDNA以提供多个经标记的cDNA样品，其中每个经标记的cDNA样品中的所述cDNA与来自单细胞的mRNA是互补的，并且其中所述标签包括细胞特异性标识符序列和可选地唯一性分子标识符(UMI)序列；将所述经标记的cDNA样品池化；可选地扩增所述池化的cDNA样品以生成包括双链cDNA的cDNA文库；以及进行标签化反应以同时切割每个cDNA并且将衔接子并入该cDNA的每个链中，由此生成多个经标记的cDNA片段。