[发明专利]单核苷酸检测方法有效
| 申请号： | 201580034262.2 | 申请日： | 2015-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN106471133B | 公开（公告）日： | 2019-07-09 |
| 发明（设计）人： | 巴纳比·巴姆福思;卡梅伦·亚历山大·弗雷林 | 申请（专利权）人： | 贝斯4创新公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 穆彬 |
| 地址： | 英国*** | 国省代码： | 英国;GB |
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| 摘要： | 单核苷酸检测方法，本发明提供一种对核酸(诸如DNA或RNA)测序的方法。其特征在于以下步骤：(1)通过核酸的逐步焦磷酸解产生单三磷酸核苷流；(2)通过在存在聚合酶和连接酶的条件下使至少一个所述单三磷酸核苷与相应的探针系统反应产生至少一种基本上双链的寡核苷酸使用的探针，所述相应的探针系统包含：(a)第一单链寡核苷酸，其用处于不可检测状态的特征性可检测元件标记，和(b)第二和第三单链寡核苷酸，其能够杂交于第一寡核苷酸上的互补区；(3)用具有双链核酸外切活性的酶消化所述使用的探针，产生处于可检测状态的可检测元件和单链的第四寡核苷酸，所述第四寡核苷酸至少部分是与第一寡核苷酸互补的序列；(4)使第四寡核苷酸与另一个第一寡核苷酸反应，以产生与所述使用的探针相对应的基本上双链的寡核苷酸产物；(5)循环重复步骤(3)和(4)，并且(6)检测在步骤(3)的每次重复中释放的特征性可检测元件。适当地，所述可检测元件是荧光团。本发明的方法由单三磷酸核苷产生比之前记载的更强的荧光信号。还公开了适当的探针系统。 | ||
| 搜索关键词： | 核苷酸 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种核酸测序方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：(1)通过核酸的逐步焦磷酸解产生单三磷酸核苷流；(2)通过在存在聚合酶和连接酶的条件下使至少一个所述单三磷酸核苷与相应的探针系统反应产生至少一种基本上双链的寡核苷酸使用的探针，所述相应的探针系统包含：(a)第一单链寡核苷酸，其用处于不可检测状态的特征性可检测元件标记，和(b)第二和第三单链寡核苷酸，其能够杂交于第一单链寡核苷酸上的互补区；(3)用具有双链核酸外切活性的酶消化所述使用的探针，产生处于可检测状态的可检测元件和第四单链寡核苷酸，所述第四寡核苷酸至少部分是与第一单链寡核苷酸互补的序列；(4)使第四单链寡核苷酸与另一个第一单链寡核苷酸反应，以产生与所述使用的探针相对应的基本上双链的寡核苷酸产物；(5)循环重复步骤(3)和(4)，并且(6)检测在步骤(3)的每次重复中释放的特征性可检测元件。
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