[发明专利]多核苷酸文库的重组酶介导的整合

摘要

本发明提供了用于使用位点特异性重组酶将感兴趣的多核苷酸文库整合到丝状真菌宿主细胞的染色体中的方法，包括宿主细胞和多核苷酸构建体的多核苷酸文库表达系统，连同包含多核苷酸文库的所得丝状真菌宿主细胞及其培养物以生产多肽。

主权项

用于使用位点特异性重组酶将感兴趣的多核苷酸文库整合到丝状真菌宿主细胞的染色体中的一种方法，所述方法包括以下步骤：a)提供丝状真菌宿主细胞，它按以下顺序在其染色体中包含：i)该重组酶的第一识别序列或在整合位点的5’或3’的区域；ii)第一选择标记；iii)该重组酶的第二识别序列；以及任选地iv)非功能部分第二选择标记；b)用核酸构建体转化所述宿主细胞，该核酸构建体按以下顺序包含：i)该重组酶的第一识别序列或在整合位点的5’或3’的区域；ii)感兴趣的多核苷酸文库；iii)第二选择标记或非功能部分第二选择标记，如果步骤(a)(iv)的相应但任选的非功能第二选择标记被包括在宿主细胞染色体中的话；和iv)该重组酶的第二识别序列；c)在所述宿主细胞中表达编码该位点特异性重组酶的基因；和d)选择转化的宿主细胞，该宿主细胞表达该第二选择标记，而不是该第一选择标记，其中这一感兴趣的多核苷酸文库是通过该重组酶位点特异性地以正确的方向整合到该宿主细胞的染色体中，由此，从该染色体切离该第一可选择标记，并且由此任何非功能部分第二可选择标记被重组，以形成该染色体中的功能第二选择标记。