[发明专利]诊断方法和组合物

摘要

本文提供了用于鉴定遗传相关信息的方法和组合物。本文提供的方法的至少部分可在没有热循环的情况下进行。方法和组合物可以包括诸如核酸聚合酶和引物等试剂。

主权项

1.一种用于检测共同双链核酸分子上的第一遗传元件和第二遗传元件的方法，该方法包括：在第一扩增反应混合物中进行第一扩增反应，其中该第一扩增反应混合物包含：i)共同双链核酸分子，其中该共同双链核酸分子包含第一链和第二链，以及第一遗传元件和第二遗传元件，其中所述第一遗传元件包含第一遗传元件第一互补序列和第一遗传元件第二互补序列，其中所述第二遗传元件包含第二遗传元件第一互补序列和第二遗传元件第二互补序列，其中所述第一遗传元件第一互补序列和所述第二遗传元件第一互补序列是所述第一链的一部分，并且其中所述第一遗传元件第二互补序列和所述第二遗传元件第二互补序列是所述第二链的一部分；ii)第一扩增反应第一引物，其中该第一扩增反应第一引物具有与所述第一遗传元件第一互补序列互补的核苷酸序列；和iii)第一扩增反应第二引物，其中该第一扩增反应第二引物具有与所述第二遗传元件第二互补序列互补的核苷酸序列，并且其中在所述第一扩增反应混合物中生成第一扩增反应产物，其中该第一扩增反应产物包含所述第一遗传元件的至少一部分和所述第二遗传元件的至少一部分，并且其中该第一扩增反应产物具有双链、线性构型；在连接反应混合物中进行连接反应，其中该连接反应混合物包含i)所述第一扩增反应产物；和ii)连接酶，并且其中在所述连接反应混合物中，由所述第一扩增反应产物形成环状连接产物，其中该环状连接产物是双链的并且包含环状连接产物第一链和环状连接产物第二链，并且其中该环状连接产物第一链包含所述第一扩增反应产物第一链的核苷酸，并且该环状连接产物第二链包含所述第一扩增反应产物第二链的核苷酸；以及在第二扩增反应混合物中进行第二扩增反应，其中该第二扩增反应混合物包含：i)所述环状连接产物；ii)第二扩增反应第一引物，其中该第二扩增反应第一引物具有与所述第一遗传元件第二互补序列互补的核苷酸序列；和iii)第二扩增反应第二引物，其中该第二扩增反应第二引物具有与所述第二遗传元件第一互补序列互补的核苷酸序列，并且其中在所述第二扩增反应混合物中生成第二扩增反应产物，其中该第二扩增反应产物包含所述第一遗传元件的至少一部分和所述第二遗传元件的至少一部分；以及检测所述第二扩增反应产物。