[发明专利]快速鉴定茎瘤芥杂交种纯度的方法

摘要

本发明公开一种采用特异性引物快速鉴定茎瘤芥杂交种纯度的方法，从600对芸薹属十字花科SSR共同引物中筛选出在杂交种亲本多态性良好的引物，进一步对茎瘤芥杂交种涪杂1号‑8号及其亲本筛选，最终筛选出两条引物SSR Na14‑G06和SSR Ol11‑G11，对茎瘤芥的特异性强，该两条引物结合引物SSR Ol13‑E03能较好的分辨出“涪杂1号‑8号”杂交种与亲本条带以及杂交种中混有的油菜、白菜和儿菜等杂株，具体包括：应用改良CTAB快速法提取茎瘤芥杂交种DNA；用筛选出的引物对杂交种DNA模板进行PCR扩增；对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，准确率高，大大缩短了茎瘤芥杂交种纯度的鉴定周期，具有较强的实用性。

主权项

1.快速鉴定茎瘤芥杂交种纯度的方法，包括DNA提取、PCR扩增步骤，其特征在于：所述的PCR扩增步骤中的PCR反应体系中包含以下序列的引物：SSR Ol11‑G11正义链序列：GTTGCGGCGAAACAGAGAAG；反义链序列：GAGTAGGCGATCAAACCGAG；另外，还包括以下序列的引物：SSR Na14‑G06正义链序列：AAACGGCTTGCATTGTTCTC；反义链序列：GGCTTGCTTGATCCAGTCTC；SSR Ol13‑E03正义链序列：CTCTGTTTCCTCTGCCCAAC；反义链序列：AGGGAAGGAAAGGACACGAC中的任意一种；所述的SSR Na14‑G06正义链序列的TM值为58℃、反义链序列的TM值为62℃，SSR Ol11‑G11、SSR Ol13‑E03的正义链序列和反义链序列的TM值均为62℃；所述的PCR反应体系中的还包括以下各组分：15μL：1×缓冲液，2.5μmol/L MgCl2、150μmol/L dNTP、1U DNA聚合酶和100ng DNA模板，每个引物含量为0.2μmol/L；所述的PCR扩增的方法为：95℃预变性5min，1个循环；95℃预变性40s，62℃退火30s，72℃延伸1min，每个循环降1℃，共11个循环；95℃预变性40s，52℃退火40s，72℃延伸1min，共30个循环，72℃再延伸5min；4℃低温保存。