[发明专利]一种野生蝉花液体菌种人工培养的优化方法

摘要

本发明公开了一种野生蝉花液体菌种人工培养的优化方法，采用优化的液体培养基配方：可溶性淀粉20g，奶粉10g,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁1g,维生素B12 10片，水1000mL，pH 5.0‑6.0；对野生蝉花菌种进行人工培养，在传统基础培养基的基础上，提出了一种系统有效的对野生蝉花液体菌种生产中最优碳源、氮源及微量营养素的筛选的优化培养方式，为野生蝉花的规模化栽培提供优良菌种技术指导。

主权项

1.一种野生蝉花液体菌种人工培养的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）液体培养基的配方：可溶性淀粉20g，奶粉10g,磷酸二氢钾0.5g,硫酸镁1g,维生素B12 10片，水1000mL，pH 5.0‑6.0；（2）液体培养基的配制：按照步骤（1）中的配方准确称量各药品，以配制1000mL培养基为例，量取1000mL的水用电磁炉烧开，然后按照易溶到不易溶的顺序依次将药品加入水中，用玻璃棒搅拌直至溶解；将配制好的培养基分装到500ml的三角瓶中，每个三角瓶装150ml,分装时避免培养基粘在三角瓶口壁上，如粘上则用纱布擦干净否则易滋生杂菌；用封口膜封口，并贴上标签；放在高压灭菌锅内灭菌，在压力为0.1‑0.2MPa，温度为121℃下，灭菌40min,待其压力降至零时，打开压力锅盖取出三角瓶放置冷却备用；（3）接种：将已灭过菌的三角瓶、接种工具、酒精棉球、酒精灯、接种环放入超净工作台中，开启紫外线灯照射30min，用70%的酒精对菌种培养皿进行消毒，操作人员的手带无粉乳胶手套并用70%酒精消毒；点燃酒精灯，在酒精灯火焰无菌区范围内，将接种针和打孔器在酒精灯火焰上灼烧消毒，用打孔器在蝉花平板菌种表面进行打孔，打孔时沿菌落最外缘向中间逐次打，边缘的菌丝生长能力比较旺盛；用消毒过的接种针挑1个菌饼块，沿着三角瓶封口薄膜一侧揭开一条缝，通过酒精灯火焰的无菌区，将菌饼块掉入三角瓶内，每个三角瓶内接2块的菌饼块；放菌饼块的时候不要接触到瓶壁，避免污染；（4）培养：接种后将三角瓶移至19℃的恒温振荡摇床中静止培养24h，后在恒温19℃，转速为120r/min的恒温振荡摇床继续培养6‑7天。