[发明专利]一种小麦花粉细胞电击法转化体系的优化方法及其应用在审
| 申请号： | 201610008311.1 | 申请日： | 2016-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN105441477A | 公开（公告）日： | 2016-03-30 |
| 发明（设计）人： | 张小红;闵东红;邵景侠;黎飞飞;赵雪晶;邓艳芳;胡晓薇;田原;付金梅;乔梦;王晓东;普正菲 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种小麦花粉细胞电击法转化体系的优化方法及其应用，以小麦成熟花粉细胞为转化受体，通过对电击液、萌发液电击条件的筛选和优化，以提高小麦成熟花粉细胞的活力和体外萌发率，利用电击转化法对与干旱、高盐和低温的诱导表达相关的转录因子基因进行转化，获得转基因植株。本发明与农杆菌转化法和基因枪转化法等目前主要转基因方法相比，花粉电击转化法具有操作简洁、成本较低、省去了组织培养的过程、避免了再生性不强和容易产生嵌合体的问题，而且受体也没有基因型限制，转化植株后代稳定纯合迅速等优点，不需要进行组织培养中的抗性筛选过程，可以获得无筛选标记的安全转基因植株。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小麦 花粉 细胞 电击 转化 体系 优化 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种小麦花粉细胞电击法转化体系的优化方法，其特征在于，所述小麦花粉细胞电击法转化体系的优化方法以小麦成熟花粉细胞为转化受体，通过对电击液、萌发液电击条件的筛选和优化，优化电击转化体系；利用电击转化法对与干旱高盐和低温等抗逆相关的转录因子基因DREB4A和W17进行转化，以获得转基因植株；所述小麦花粉细胞电击法转化体系的优化方法具体包括：从菌液中分别提取含DREB4A和W17基因的质粒；小麦花粉最适电击液的优化；电击后FDA染色和观察、统计；电击后花粉萌发液的优化处理；授粉及后处理；基因组DNA的提取；PCR检测转基因植株。
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