[发明专利]一种利用赤霉菌CA3-1合成11α;15α-diOH-坎利酮的方法

摘要

本发明属生物技术领域，具体涉及利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1转化底物坎利酮为11α,15α‑diOH‑坎利酮的方法。该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.4903。赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1能转化坎利酮为11α,15α‑diOH‑坎利酮，在底物投料浓度为4g/L时，坎利酮转化率高达90.1％，11α,15α‑diOH‑坎利酮的得率为58.5％。11α,15α‑diOH‑坎利酮的合成为甾体药物及其中间体的研究提供了更多元化的前体，具有一定的研究价值和市场意义。

主权项

1.一种利用赤霉菌CGMCC No.4903转化坎利酮为11α,15α‑diOH‑坎利酮的方法，其特征为：(1)所述赤霉菌CGMCC No.4903为赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1，保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4903，保藏日期为2011年5月24日，分类命名为Gibberella intermedia；(2)以赤霉菌CGMCC No.4903为生产菌株，25～35℃，150～220r/min条件下活化培养得到种子液，然后将种子液稀释涂布到PDA平板上；PDA培养基的成分及配比为：土豆200～500g/L；葡萄糖20～50g/L；酵母粉2～10g/L；琼脂粉10～20g/L；pH自然，在121℃高压蒸汽下灭菌20min；(3)挑取步骤(2)PDA固体培养基上的赤霉菌CGMCC No.4903菌株一环，接种于已灭菌的装有50～100mL种子培养基的500mL锥形瓶中，培养温度为25～35℃，置摇床上以180～220r/min的转速培养12～20h至对数生长中后期，得到赤霉菌CGMCC No.4903种子培养液；种子培养基的成分及配比为：葡萄糖10～30g/L；酵母粉5～15g/L；NaCl 0.5～2g/L；KH2PO41～5g/L；调pH至7.0，121℃高压蒸汽灭菌15～20min；(4)将步骤(3)种子培养液以体积百分比4％～8％的接种量接种于发酵培养基，装液量为250mL锥形瓶中装25～50mL发酵培养基，培养温度25～35℃，置摇床上以180～220r/min转速下培养20～24h，得发酵液；发酵培养基的成分及配比为：葡萄糖10～30g/L；酵母粉5～15g/L；玉米浆1～5g/L；pH自然，121℃高压蒸汽灭菌15～20min；(5)准确称取适量的底物坎利酮投入到步骤(4)菌体发酵液中，使其终浓度为4～8g/L，转化温度28℃，200～220r/min转速下转化48～60h，即得转化液。