[发明专利]用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒

摘要

本发明公开了用于检测人类CKIT基因7种突变的探针、引物及试剂盒，其中CM1～CM7的7组引物和探针，每组中突变上游引物能与CKIT基因保守序列结合，突变下游ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测CKIT基因7种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对CKIT基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

主权项

1.用于检测人类CKIT基因7种突变的引物和探针，其特征在于，核苷酸序列如下：CM1：D816V突变突变上游引物CW1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游ARMS引物CM1‑R：SEQ ID NO:2，检测探针CW1‑P：SEQ ID NO:7，阻断探针CW1‑B1：SEQ ID NO:8；CM2：D816H突变突变上游引物CW1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游ARMS引物CM2‑R：SEQ ID NO:3，检测探针CW1‑P：SEQ ID NO:7，阻断探针CW1‑B1：SEQ ID NO:8；CM3：N822K突变突变上游引物CW1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游ARMS引物CM3‑R：SEQ ID NO:4，检测探针CW1‑P：SEQ ID NO:7，阻断探针CW1‑B2：SEQ ID NO:9；CM4：N822K突变突变上游引物CW1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游ARMS引物CM4‑R：SEQ ID NO:5，检测探针CW1‑P：SEQ ID NO:7，阻断探针CW1‑B2：SEQ ID NO:9；CM5：Y823D突变突变上游引物CW1‑F：SEQ ID NO:1，突变下游ARMS引物CM5‑R：SEQ ID NO:6，检测探针CW1‑P：SEQ ID NO:7，阻断探针CW1‑B2：SEQ ID NO:9；CM6：V654A突变突变上游引物CW2‑F：SEQ ID NO:10，突变下游ARMS引物CM6‑R：SEQ ID NO:11，检测探针CW2‑P：SEQ ID NO:12，阻断探针CW2‑B：SEQ ID NO:13；CM7：T670I突变突变上游引物CW3‑F：SEQ ID NO:14，突变下游ARMS引物CM7‑R：SEQ ID NO:15，检测探针CW3‑P：SEQ ID NO:16，阻断探针CW3‑B：SEQ ID NO:17；其中，所述检测探针的核苷酸序列5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；阻断探针的核苷酸序列5’端经过双脱氧修饰，3’端标记有淬灭基团。