[发明专利]细菌超氧化物歧化酶及其制备方法有效
| 申请号： | 201610023562.7 | 申请日： | 2016-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN105567650B | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 司朝利;廖振林;赖学能 | 申请（专利权）人： | 广州市康优元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 李海恬;万志香 |
| 地址： | 510000 广东省广州市萝岗区科学城瑞*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种细菌超氧化物歧化酶及其制备方法，所述细菌超氧化物歧化酶由保藏编号为CCTCC M 2015633的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)发酵培养制备得到，包括格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)的活化、种子液的制备、发酵培养以及超氧化物歧化酶的制备的步骤。该方法制备得到的超氧化物歧化酶产量高、活性好、稳定性好，制备过程简单、成本低。 | ||
| 搜索关键词： | 细菌 超氧化物歧化酶 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种细菌超氧化物歧化酶的制备方法，其特征在于，该细菌超氧化物歧化酶包括酶液和酶粉两种形式，由保藏编号为CCTCC NO:M 2015633的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)发酵培养制备得到，包括以下步骤：(1)格氏乳球菌的活化：将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)在琼脂‑M17培养基上活化；(2)格氏乳球菌种子液的制备：将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)接种于液体培养基中培养得到格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)种子液；所述液体培养基为M17肉汤培养基；(3)格氏乳球菌的发酵培养：将格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)种子液接种于发酵培养基中发酵培养后，离心收集的发酵湿菌体直接用于下一步超氧化物歧化酶的制备，或者将离心收集的发酵湿菌体冻干得到冻干菌粉；所述发酵培养基的成分包括：0.1～10wt％的碳源，0.1～10wt％的氮源，0～5wt％氮源以外的无机盐；其中，所述碳源选自0.1～10wt％葡萄糖、0.5wt％蔗糖，氮源选自1wt％蛋白胨、1～10wt％酵母浸膏，氮源以外的无机盐选自0.1～0.8wt％硫酸氢二钾、0.02～0.1wt％硫酸镁、0.1wt％硫酸铵；(4)超氧化物歧化酶的制备：将步骤(3)收集的发酵湿菌体或者冻干菌粉，悬浮于pH为7.2‑8.5的磷酸缓冲液中，加入溶菌酶裂解2～24h，离心，将上清液调节pH为4.0～5.6，冰冷放置1‑3h，离心除沉淀，即得细菌超氧化物歧化酶酶液；或将酶液冻干即得细菌超氧化物歧化酶酶粉。
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