[发明专利]霍乱弧菌荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种采用实时荧光PCR方法特异性检测样品中霍乱弧菌01型和0139型核酸存在的寡核苷酸序列组合，以及包括该组合的试剂盒。利用本发明的试剂盒，可快速检测样品中是否存在霍乱弧菌01和0139型核酸。该试剂盒对霍乱弧菌核酸的检测限为10拷贝每反应体系，整个反应可在3-4小时内完成，在疾病监测、临床诊断等领域具有重要的应用价值。

主权项

一种用于特异性检测样品中霍乱弧菌核酸的试剂盒，同时用于定性区分O1和O139群，其中包括PCR反应液、酶混合液、阴性质控品和阳性质控品；PCR反应液中用于核酸扩增反应的引物序列如下：P1‑1：5`‑ ata ttg atc cga caa gcc caa atg ‑3`，P1‑2：5`‑ cga tgt tga ggc gaa gtt tag g ‑3`，P2‑1：5`‑ tga tgt tgt ggg ata agc aat ctt ‑3`，P2‑2：5`‑ ctc agc aat gcg gtg gtc ta ‑3`，PCR反应液中用于荧光信号监测的寡核苷酸探针的序列如下：Probe1：5`‑X<sub>1</sub>‑ cgc cgc aat acg agc ccc aag gt ‑Y<sub>1</sub> ‑3`，Probe2：5`‑X<sub>2</sub>‑ aa ccc gcc ctt cta atg aac acg cca ‑Y<sub>2</sub> ‑3`，Probe1荧光报告基团X₁为FAM，荧光淬灭基团Y₁为Eclipse，Probe2荧光报告基团X₂为CY5，荧光淬灭基团Y₂为BHQ。