[发明专利]一种增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法

摘要

本发明公开了一种增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法，包括以下步骤：步骤一、培养基的制备；步骤二、发酵制备酶液：培养基冷却后接种曲霉孢子悬液，在30℃条件下培养4～6天，提取酶液；对于液态发酵，发酵液直接过滤去除菌体即可得到粗酶液；对于固体培养基，发酵后向培养基中加入pH 7.0的磷酸盐缓冲液，在20℃条件下，振荡速度180rpm浸提1h，过滤去除菌体得到粗酶液；步骤三、用酶处理茶叶或者茶叶提取物：向茶叶或者茶叶提取物中加入所述酶液，在固水比为1:5～1:30，温度10℃～70℃下进行酶反应；步骤四、测定EGCG含量变化。采用本发明后，茶叶或茶叶提取物中的EGCG含量大幅度提高。

主权项

1.一种增加茶叶及其加工产品中EGCG含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、培养基的制备：所述培养基按以下质量百分比 的组分组成：0.5～70％的碳源，0.05％的氯化钾，0.01％的七水合硫酸镁，0.1％的柠檬酸三钠二水合物，0.1％的无水柠檬酸，0.1％的酵母提取物，0.1％的干酪素水解物，用1M的HCl把pH调到4.0；每个250mL锥形瓶中加入25mL培养基，121℃高压蒸汽灭菌20min；所述碳源为果胶、麦麸、蔗糖中的一种；步骤二、发酵制备酶液：培养基冷却后接种曲霉孢子悬液，所述孢子悬液孢子含量为1×10⁸个/ml，在30℃条件下培养4～6天，提取酶液；对于液态发酵，发酵液直接过滤去除菌体即可得到粗酶液；对于固体培养基，发酵后向培养基中加入pH 7.0的磷酸盐缓冲液，在20℃条件下，振荡速度180rpm浸提1h，过滤去除菌体得到粗酶液；步骤三、用酶处理茶叶或者茶叶提取物：向茶叶或者茶叶提取物中加入所述酶液，在固水比为1:5～1:30，温度10℃～70℃下进行酶反应；步骤四、测定EGCG含量变化：采用液相色谱‑质谱联用仪测定茶样品中EGCG的含量；其中，色谱柱Nucleodur PFP规格为250×4.6mm；柱温35℃；流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液，洗脱梯度：0‑1min，95％A和5％的B，1‑6min，85％A和15％的B，6‑20min，70％A和30％的B，20‑25min，95％A和5％的B；进样量5.0μL，色谱流速0.5ml/min；质谱所用的离子源为Agilent Jet Stream ESI，负离子模式采集；干燥气温度300℃，干燥气流速10l/min，雾化气压力45psi，鞘气温度350℃，鞘气流速12l/min，毛细管电压3000V，喷嘴电压500V。