[发明专利]一种液体深层发酵法生产桦褐孔菌木质纤维素降解酶的工艺

摘要

本发明公开了一种液体深层发酵法生产桦褐孔菌木质纤维素降解酶的工艺，以桦褐孔菌为发酵菌种，采用液体深层发酵法，以木质纤维素基质为主要发酵原料，配合促进剂、诱导剂协同发挥作用，从而发酵获得木质纤维素降解酶。本发明具有发酵时间短、不容易感染杂菌、木质纤维素降解酶易于提取纯化等优点。

主权项

一种液体深层发酵法生产桦褐孔菌木质纤维素降解酶的工艺，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌种活化：以桦褐孔菌为菌种，接种至斜面菌种培养基上培养，获得活化菌种；(2)液体菌种培养：将活化菌种转入液体种子培养基中，摇床培养至对数期得液体菌种；(3)液体深层发酵：将液体菌种接入液体深层发酵培养基中发酵培养，液体菌种与液体深层发酵培养基的体积比为1:8‑10，所述液体深层发酵培养基的配方为：玉米粉2‑6g/L，木质纤维素基质40‑48g/L，促进剂1.2‑1.5g/L，诱导剂5×10^‑5‑9×10^‑5g/L，蛋白胨2.3‑2.5g/L，酵母粉1.2‑1.5g/L，KH₂PO₄0.8‑1g/L，Na₂HPO₄0.2‑0.4g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5‑0.6g/L，pH值6.0；液体深层发酵的工艺参数为：发酵温度27‑28℃，发酵罐空气流量0.5‑1.0vvm，发酵罐内部压力0.1‑0.25kg/cm³，搅拌转速70‑150转/分钟，发酵时间3‑11天；(4)桦褐孔菌木质纤维素降解酶制备：发酵结束后，将发酵产物过滤，获得发酵液，在发酵液中加硫酸铵至硫酸铵的终浓度为20wt％，离心10‑15分钟后收集上清液，再往上清液中加入硫酸铵至硫酸铵的终浓度为80wt％，离心15‑25分钟后收集沉淀，沉淀溶解在醋酸‑醋酸钠缓冲液中，透析，冷冻干燥。