[发明专利]一种水蛭多肽的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种水蛭多肽的分离纯化方法，首先将水蛭提取物加入模仿人体肠细胞吸收的系统中培养，然后将被吸收的物质进行层析分离即可。本发明的发明人从不同的角度解决了水蛭多肽的分离纯化男的问题，通过将水蛭提取物首先采用Caco‑2细胞进行纯化，模仿了中药水蛭在体内的消化吸收过程，经过模拟肠道细胞的吸收作用，将大量的不能被人体肠道细胞吸收的多肽首先分离出来，简化了分离纯化过程，然后再经过阴离子交换柱层析和凝胶过滤层析既可以分离纯化得到能被人体吸收利用的多肽。通过本发明的方法分离纯化得到的多肽具有抑制血管平滑肌细胞迁移的作用。

主权项

1.一种水蛭多肽的分离纯化方法，其特征是：首先将水蛭提取物加入模仿人体肠细胞吸收的系统中培养，然后将被吸收的物质进行层析分离即可；其中，水蛭提取物的提取方法如下：取水蛭干燥全体粉碎成20‑150目粉末，加入6‑16倍重量的水，或者水蛭鲜活全体，加入1‑6倍重量的水，匀浆；取匀浆液，调节pH至7‑9，按每1g水蛭干药材加入2000‑20000U酶的比例加入胰蛋白酶，控制温度40‑60℃，酶解2‑12小时，冷却至室温；酶解完后，向上述酶解液中加入1‑5倍体积的丙酮或者乙醇冷藏沉淀4‑12小时，过滤，滤液减压干燥，得水蛭提取物；所述模仿人体肠细胞吸收的系统为具有或长满人结直肠腺癌Caco‑2细胞的transwell小室；所述层析分离首先经阴离子交换柱层析，浓度为0.5‑2mol/L的NaCl溶液线性洗脱，收集各个峰的活性成分，经血管平滑肌细胞迁移筛选，取活性最高的一个峰的活性成分，浓缩并干燥，然后将浓缩并干燥后的活性成分，用蒸馏水溶解，再经过凝胶过滤层析，所述凝胶过滤层析柱的填料为Sephadex LH‑20，蒸馏水洗脱，收集各个峰的活性成分，经血管平滑肌细胞迁移筛选，取活性最高的一个峰的活性成分，收集此处的活性组分，即可。